凝膠層析法
1 ．凝膠的選擇 根據層析物質分子量的大小選擇不同型號的凝膠，如除鹽和除游離的熒光素，則可選用粗、中粒度的 G28 或 G500 ， G250 多用于分離蛋白質單體， G200 多用于分離蛋白質凝膠聚合體等。
2 ．凝膠的預處理 稱取適量的凝膠加入過量的緩沖液在冰箱（或室溫）中充分膨脹，或在沸水中煮，膨脹時間應根據不同型號的凝膠而定。為使粒子均勻一致需進行浮選，即加入凝膠粒子后，輕輕攪拌，靜置 20min ，傾去沉淀的粒子，如此反復數次即可。
3 ．裝柱 層析柱的選擇一般根據分離樣品的種類和樣品的數量而定。純化蛋白質時，柱床體積應為樣品體積的 25 ～ 100 倍。去鹽、游離熒光素約為樣品體積的 4 ～ 10 倍。柱太短，影響分離效果。柱長一些，分離效果好，但柱太長，則延長分離時間，樣品也稀釋過度。層析柱的內徑也要選擇適當。內徑過細，會發生“器壁效應”，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影響分離效果。所以層析柱的內徑和高度應有一定的比例。對于除鹽來說應為 1 ︰ 5 ～ 1 ︰ 25 ；對于純化蛋白質來說應為 1 ︰ 20 ～ 1 ︰ 100 。
裝柱過程基本同離子交換層析柱。
4 ．加樣與洗脫 樣品體積不宜過多，最好為床體積的 1 ％～ 5% ，最多不要超過 10% 。樣品濃度也不宜過大，濃度過大粘度大，分離效果差，一般不超過 4% 。
洗脫液應與膨脹一致，否則更換溶劑，凝膠體積會發生變化，影響分離效果。洗脫液要有一定的離子強度和 pH 值。分離血清蛋白常用 0.02 ～ 0.1Mol/L pH 6.9~8.0 的 PBS 液（ 0.14Mol/L NaCl ）和 0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl 緩沖鹽溶液（ 0.14Mol/L NaCl ）。
5 ．洗脫液收集 同離子交換層析。
6 ．凝膠柱的重復使用與保存 當樣品的各組分全部洗脫下來之后，即可加入新的樣品，繼續使用。保存方法有三種：
⑴ 在液相中保存最方便，即于凝膠懸液中加入防腐劑（一般為 0.02%N2 N3 或 0.002% 洗必泰）或高壓滅菌后 4 ℃保存。此法至少可以保存半年以上。
⑵ 用完后，以水沖洗，然后用 60%~70% 酒精液沖洗，凝膠體積縮小，即在半收縮狀態下保存。
⑶ 長期不用者，最好以干燥狀態保存，即水洗凈后，用含乙醇的水洗，逐漸加大乙醇用量，最后用 95% 的乙醇洗，可全部去水，再用乙烯去除乙醇，抽濾干，于 60 ℃ ~ 80 ℃干燥后保存。
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