紙色譜的制作及產品的分離
一、實驗目的
初步學習用紙上層析法進行分離鑒定氨基酸。
二、實驗內容和要求
紙色譜法是屬于分配色譜的一種，通常用特制的濾紙如新華一號濾紙作為固定相（水的支持劑），含有一定比例的水的有機溶劑（展開相）作流動相，應用于多官能團或高極性化合物如糖或氨基酸的分離、鑒定。
Rf比移值是一個特定常數。Rf值隨被分離化合物的結構、固定相與流動相的性質、溫度等因素不同而異。當溫度、濾紙等實驗條件固定時，它是一個常數。這也就是用紙色譜進行定性分析的依據。
一個計劃周到的分離、鑒定微量氨基酸的紙色譜的操作訓練，對學生了解紙色譜的原理方法和應用是很必要的。我們用標準氨基酸作出紙色譜和Rf值，與在相同條件下作出的混合物的紙色譜和Rf相對照，以達到分離、鑒定氨基酸的目的。當然，在實際應用中，紙上層析的操作要復雜得多。尤其是Rf值相接近的氨基酸需要用兩向紙上層析才能達到分離鑒定的目的。我們配制的“未知”混合物試樣是有意選擇Rf值相差較大的樣品。所以用單向紙上層析就能達到分離鑒定的目的。
氨基酸經紙上層析后，常用茚三酮顯色劑顯色。必須注意！指印含有一定量的氨基酸，在本實驗方法中足以檢出（本法可以檢出以微克計的痕跡量）。因此，不能用手直接觸摸分析用的濾紙，要用鑷子鉗夾濾紙邊。
三、實驗主要 儀器 設備和材料
濾紙、鉛筆、毛細管、氨基酸、乙醇-水-醋酸展開劑、茚三酮溶液
烘箱 、標本缸
四、實驗方法、步驟及結果測試
1. 標準氨基酸色列和混合物色列的制作
取一條8×15cm濾紙，在濾紙短邊1cm處用鉛筆輕輕畫上一條線，在線上輕輕打上四個點（等距并編號）。
用毛細管蘸試樣在鉛筆線的點上打三個標準氨基酸試樣斑點（每打一個試樣，換一根毛細管，以免弄臟樣品）。再用毛細管打上一個混合物的斑點。斑點的直徑約為1.5mm，不宜過大。將試樣號碼計于實驗記錄本上；并把濾紙放在空氣中晾干。
取一標本缸，加入20ml乙醇-水-醋酸展開劑，蓋上玻璃片使標本缸內形成此溶液的飽和蒸汽。
將濾紙小心放入上述標本缸中，不要碰及缸壁。當展開劑的前沿位置達到濾紙上端約一公分處，小心取出濾紙，用鉛筆作下展開劑前沿位置的記號。記下展開劑吸附上升所需的時間、溫度和高度。將此濾紙于105℃ 烘箱 中烘干。
2. 顯色
用洗相的方式將濾紙在茚三酮溶液中浸泡一下或用噴霧方式將茚三酮溶液均勻地噴在濾紙上，并放回烘箱中于105℃烘干。此時，由于 氨基酸 與茚三酮溶液作用而使斑點呈色。用鉛筆劃出斑點的輪廓以供保存。量出每個斑點中心到原點的距離，計算每個 氨基酸 的Rf值。
五、注意事項
[1]? 實驗室準備的六組混合物試樣是由Rf值相差較大的氨基酸混合配制，以期單向紙上層析便能達到分離的目的。
這六組混合樣品是：
氨基酸 Rf 氨基酸 Rf
Ⅰ： 半胱氨酸 0.25
Ⅱ： 組氨酸 0.23 谷氨酸 0.36
蘇氨酸 0.40 蛋氨酸 0.62
輔氨酸 0.53
Ⅲ： 甘氨酸 0.28
Ⅳ： 天門冬氨酸 0.22 丙氨酸 0.49
色氨酸 0.40 異亮氨酸 0.79
蛋氨酸 0.62
Ⅴ： 賴氨酸 0.30
Ⅵ： 精氨酸 0.31 酪氨酸 0.49
輔氨酸 0.53 異亮氨酸 0.79
異亮氨酸 0.79
上述Rf值是用展開劑乙醇-水-醋酸（50：10：1體積比），溫度23℃，展開劑吸附上升時間70min。平均展開劑吸附高度7.5cm，所測得的數據。
所用何種混合試樣就用其對應的標準試樣，以便對照。
六、實驗報告要求
字跡工整，條理清晰，記錄好實驗現象和實驗數據，如實分析實驗誤差。
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