蛋白質(zhì)組學(xué)入門－－HPLC 篇

1 ． HPLC 靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
樣品與檢測(cè)器不匹配：根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
檢測(cè)器衰減太多：調(diào)整衰減即可。
檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大：解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
檢測(cè)器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。
檢測(cè)池中有氣泡：解決辦法為排氣。
記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)：調(diào)整電壓范圍即可。
流動(dòng)相流量不合適：調(diào)整流速即可。
檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。
2 ． 做 HPLC 分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在? 如何解決?
原因可能有： 
泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理；
比例閥失效，更換比例閥即可。
泵密封墊損壞，更換密封墊即可。
溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；
系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可。
梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。
3 ．我購買的 HPLC 柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過高，請(qǐng)問為什么?
柱壓過高是 HPLC 柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。
拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；
把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。
將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用 10 倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子， ( 此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)性 ) 。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；
更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題， SGE 提供的 Rheodyne 7315 型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。
4 ．液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子。

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