銀染操作規(guī)程
實驗?zāi)康模?/span>
檢測聚丙烯酰胺 凝膠中的蛋白質(zhì)。
實驗原理：
在堿性條件下，用甲醛將蛋白帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，以使銀顆粒沉積在蛋白帶上。染色的程度與蛋白中的一些特殊的基團有關(guān)，不含或者很少含半胱氨酸殘基的蛋白質(zhì)有時候呈負染。銀染的詳細機制還不是非常清楚。
試劑：乙醇、冰醋酸、乙酸鈉、硫代硫酸鈉、硝酸銀、碳酸鈉、甘氨酸或EDTA .Na2.2H2O、甲醛
實驗操作程序：
固定：30min或者更長時間
100ml 乙醇 40% 乙醇
25ml冰醋酸 10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏：30min
75ml 乙醇 30% 乙醇
17g 乙酸鈉 28.2g 三水乙酸鈉
0.5g硫代硫酸鈉
加水到終體積250ml
水洗：3 x 10min
銀染：20min
0.625g AgNO3
100 ul 37%甲醛
加水到終體積250ml
水洗： 2 x 1 min (注意把握時間，水洗時間長顯色速度慢，點的顏色偏黃色)
顯色：視情況而定
6.25 g Na2CO3
50 ul 37% 甲醛
加水到終體積250ml
終止：10min
3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸
加水到終體積250ml
保存：1% 冰醋酸，4 ℃
注意事項：
1．固定時間較長，則加一步水洗30min，以免膠太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3．最好多配制一份顯色液，第一次顯色到溶液變混濁時換一份顯色液，顯色到點清晰。
4． 顯色過程很快，要注意把握時間，避免染色過度。
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