ELISPOT的優勢
ELISPOT的優勢
ELISPOT斑點酶聯免疫分析使細胞 因子分泌過程更加形象。因為細胞 因子圍繞在細胞 周圍,在被上清液稀釋之前,會和鄰近細胞 表面的受體結合,或者降解。細胞 因子和GranzemyB ELISPOT實驗是最有效的體外監控CD4或CD8T細胞 抗原的方法。通過測定單個細胞 因子信號及其頻率,可以建立具有不同集落大小的特殊T細胞 庫。
ELISPOT實驗檢測細胞 因子的獨特優勢
☆從1到10,000,000,可以精確測量體外細胞 因子的分泌頻率,和ELISA 以及四聚體染色、細胞 內細胞 因子染色相比,具有靈敏度高、特異性好的特點。提高靈敏度非常關鍵,因為體內產生抗原特異性T細胞 的頻率非常低。
?☆大批量細胞 分析:可以分析上百個樣品,檢測多種抗原。
?☆所需細胞 濃度低。和其他試驗方法相比,ELISPOT方法對細胞 濃度沒有太高的要求,比如,檢測600中不同的抗原或肽段只需要45ml血。
?☆可以確定CD4或者CD8抗原決定簇。因為實驗所需細胞 量少,實驗靈敏,所有ELISPOT對于決定簇圖譜的繪制,肽段文庫的篩選是最理想的選擇。
☆可以建立抗原特異性T細胞 親和函數
?☆可以研究未經藥物處理過的T細胞 的實際細胞 因子分泌過程,T細胞 分泌物下降,則說明T細胞 產量減低或者單個細胞 分泌功能下降。
?☆ELISPOT不破壞淋巴細胞 活性,可以繼續進行細胞 克隆以及低溫儲藏研究
?☆低溫存藏的人淋巴細胞 可以繼續保持生物學活性,可以重復實驗步驟。
ELISPOT是現今研究T細胞 功能,進行T細胞 診斷最有力的工具,ELISPOT的研究已經成為一門科學。
ELISPOT分析儀專利草案
在病理學教授Paul V. Lehmann博士帶領下,眾多學者共同在CWRU大學通過了新一代ELISPOT分析儀的專利認證。 最初ELISPOT是為了檢測B細胞 分泌抗體而問世的,因為T細胞 分泌細胞 因子而B細胞 產生抗體,新一代的ELISPOT增加了檢測T細胞 分泌細胞 因子的功能。
ELISPOT分析具有精確性、客觀性,可重復性以及自動化特點,改變了以往ELISA 的耗時,結果不客觀的缺點。
ELISPOT分析儀的出現解決了以下問題
?☆哪些斑點是抗原特異性T細胞 產生的(此斑點具有進一步分析價值),哪些是無關細胞 產生的(此斑點沒有T細胞 研究價值)
?☆斑點大小的意義
?☆在對不同細胞 因子計數和分析時,如何定義斑點最大和最小尺寸
?☆如何從單個細胞 基礎上分析
?☆實驗精確度有多高?如果一個細胞 產生相似的細胞 因子,在多大程度上會干擾分析結果?
?☆幾次重復實驗才能使結果更有意義?
ELISPOT:世界一流科學家辛勤勞動的果實
ELISPOT分析儀的最初研究在CWEU大學開始,由26名工作人員,15個科研工作者,和許多來自BD、Pharmingen的科學工作者共同努力下研制成功的,為此CTL也成為美國國立衛生院免疫耐受網絡(ITN)指定的參考實驗室,專門對各種ELISPOT臨床試驗結果進行測試。
經科學認證的ELISPOT分析儀包括三個分析模式,適用于客戶不同的消費水平、研究目的、外圍設備,附屬軟件和數據處理方法。另外,CTL提供圖像分析服務,ELISPOT有自己的網上實驗室,可以提供網絡培訓以及為臨床試驗項目按照合同約定提供研究服務。
EILISPOT:科學革命
自從CTL發起ELISPOT革命以來,很多人在借鑒我們的成功經驗。作為創始人,CTL致力于開創ELISPOT新方法并將其提高到科學的高度
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