DIG標記探針的分子雜交
放射性核素因其靈敏度高而被人們利用在雜交篩選中，但它標記探針可利用時間短（放射性同位素有半衰期，如32P為14.2天），并且對人體有害，易污染環境，所以近年來逐步發展了非放射性雜交篩選。按照標記方法的不同,主要有兩類, 一種是預先已連在NTP 或dNTP上, 因此可象放射性核素標記的核苷酸 一樣用酶促聚合反應方法參入到核酸探針上, 如生物素, 地高辛等, 由于生物素等標記物是連接在堿基上, 而不是磷酸基團, 因此不能用多核苷酸激酶進行末端標記。 另一類是直接與核酸進行化學反應而連接在核酸上, 如生物素化學標記法的主要思路是: 將生物素與另一種化學性質較活潑的基團相連, 在特定的條件下是活潑基團活化而與核苷酸特定部位共價結合.
DIG（地高辛）、HRP（辣根過氧化物酶）及生物素等, 它們常通過顯色，發光來顯示雜交信號。本實驗中就是通過連接臂共價連接在dUTP C11上，如圖13所示。DIG標記的dUTP代替部分dTTP摻入待標探針中，經雜交后用與堿性磷酸酶Ap（alkaline phosphatase）連接的DIG抗體發生免疫 反應，通過Ap使反應底物CSPD脫磷，脫磷后的產物不穩定，繼續分解同時釋放出光子，可用X-光片顯示雜交信號。
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