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電泳技術(shù)新進展
發(fā)布日期:2023-04-27 11:44:25


電泳技術(shù)新進展


一、電泳技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合,大大擴大了其臨床應(yīng)用的范圍
  讓電流來加速抗原抗體的擴散并規(guī)定其運行方向、從而加快了沉淀反應(yīng)速度。免疫電泳技術(shù)的種類很多,如:對流免疫電泳(CIEP)、火箭免疫電泳(RIE)、電免疫擴散(EID)。該技術(shù)的最大優(yōu)勢是敏感性達50-150mg/dl,操作周期短,分辨率高,結(jié)果易于分析。現(xiàn)最常用于M蛋白的分型與鑒定,已列入臨床實驗室的常規(guī)檢測工。
二、電泳技術(shù)進行同工酶譜分析,提高診斷率
  1.血清乳酸脫氫酶同工酶(ISO -LDH):測定LDH同工酶有電泳法、離子交換柱層析法、免疫法、抑制劑法和酶切法,但迄今用得取多的仍是瓊脂糖凝膠電泳法。經(jīng)電泳分離后要分離出五種同工酶區(qū)帶,急性心肌梗塞發(fā)病后平均6h LDH1即開始升高,LDH1/LDH2≥1為心肌損傷的陽性決定性水平,肝癌時可見LDH5明顯升高,各區(qū)帶含量的確定,將經(jīng)電泳分離后的同工酶譜采用掃描予以定量,其精確度明顯高于用肉眼判斷。
  2.血清肌酸激酶同工酶(ISO-CK);測定CK和CK-MB仍是目前用于證實急性心肌梗塞的首選指標。近年來國內(nèi)一些單位用免疫抑制法測CK-MB,使用電泳方法分離CK-MB,是根據(jù)CK-同工酶分子結(jié)構(gòu)不同,在電泳緩沖液中,所帶電荷各異,可以從陰極到陽極將CK不同組份予以分離,其分別為CK-MM,CK-MB和CK-BB。電泳特點是當(dāng)出現(xiàn)異常同工酶如巨CKⅠ、巨CKⅡ等,從電泳圖譜上很容易發(fā)現(xiàn),由掃描儀對各條酶進行掃描,報告各條區(qū)帶所占百分比,結(jié)合總酶活力,求得區(qū)帶的酶活力定值結(jié)果。Macro-CK在CK-MM和CK-MB中間,而CK-MT位置靠近陰極端,在CK-MM后面。這樣不會將CK-BB和各種異常同工酶誤認為是CK-MB而誤診,也可解決CK-MB假性增高的錯誤原因所在。為此,CK同工酶電泳是項非常實用的檢驗技術(shù),具有十分重要的臨床意義。
  3.CK亞型同工酶:此外,CK-MB和CK-MM亞型測定常采用瓊脂糖凝膠等電聚焦電泳或高壓電泳,由于操作比一般電泳麻煩,故常規(guī)常測定尚無法普及。目前引進的自動電泳儀,有 試劑 盒提供,可作CK亞型分析,參考值:CK-MM1(57.7±4.7)%;CK-MM2為(26.5±5.3);CK-MM3為(15.8±2.5)%;CK-MM3/CK-MM1比值為0.28±0.05(范圍0.15-0.39),陽性決定性水平>0.5。AMI第一天血中以MM3為主,但第二天以后則以MM1為主。采用電泳法分離CKMB,CKMB1和CKMB2在正常人血中CK-MB2極微,一般比值近似1,在急性心肌梗塞后4-6h CKMB2亞型即在血循環(huán)中可被檢測到,故MB2/MB1的比例明顯升高,并早于總CK-MB片段的增高。當(dāng)心肌梗塞緩解后此比值也逐漸下降。也可用于溶栓治療后的病情觀察。
三、結(jié)合酶免疫標記抗體技術(shù),檢測腦脊液內(nèi)寡克隆區(qū)帶
  曾有作者報道采用二維電泳和銀染進行CSF蛋白質(zhì)的分離與鑒定,方法繁復(fù),耗時,現(xiàn)采用高分辨率瓊脂糖凝膠電泳分離CSF中的蛋白質(zhì),并經(jīng)抗原和辣根過氧化物酶標記的特異性IgG抗體進行反應(yīng)來鑒定“寡克隆區(qū)帶”(OCB),經(jīng)此酶免疫標記放大技術(shù)和顯色步驟,蛋白質(zhì)濃度達31-125ul/L即可予以檢測,可使檢測靈敏度提高了100倍,這樣腦脊液無須濃縮,避免了在濃縮過程中蛋白質(zhì)的丟失。可用于證實和分辨OCB 免疫球蛋白 及其型別。若在腦脊液標本中檢出OCB,而其相應(yīng)標本中未能檢出區(qū)帶,則為陽性,真實地反映是由中樞神經(jīng)系統(tǒng)本身合成的 免疫球蛋白 ,具有重要臨床意義。它是一種定性檢測,在多發(fā)性硬化癥時,OCB是一個十分重要的標志物。但須將患者 血清 和CSF在同一天同步進行分析,以認證不同來源的免疫球蛋白。中樞合成免疫球蛋白是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患的一個重要信號,主要用于診斷和鑒別診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患如:多發(fā)性硬化癥、癡呆、脊髓炎、神經(jīng)性梅素等。
四、利用固相內(nèi)抗原、抗體反應(yīng)分離脂蛋白(a),用于心、腦血管獨立的危險因子的檢測  
  該該技術(shù)是利用抗原、抗體反應(yīng)將電泳分離的脂蛋白予以鑒別。 血清 經(jīng) 瓊脂 糖凝膠電泳,再經(jīng)染色后可出現(xiàn)不同脂蛋白的條帶。由于凝膠中脂蛋白等電點不同,不僅可區(qū)分a、前β和β區(qū)帶,又因介質(zhì)中含有抗脂蛋白(a)[LP(a)]抗體及陽離子存在,抗LP(a)與患者血清中LP(a)結(jié)合形成復(fù)合物,陽離子則抑制其他脂蛋白的泳動速度,LP(a)便與其他脂蛋白分離開來,使分辨十分清晰的LP(a)條帶呈現(xiàn)在前β與γ區(qū)域之間,將陽性條帶掃描后,可獲得區(qū)帶的面積及其百分含量,該方法使電泳技術(shù)趨于完美,大大減少了手工操作的弊端,既可予以半定量,又能將膠片保存,便于比較。提高對心、腦血管獨立的危險因子--LP(a)檢測的敏感性和特異性。
五、按分子量大小進行非濃縮尿蛋白電泳,區(qū)分尿蛋白類型
  尿蛋白電泳可將尿液中各種蛋白質(zhì)分離用于區(qū)分尿蛋白類型,可在無損傷的情況下,協(xié)助臨床判斷腎臟損傷的部位。國內(nèi)部分實驗室采用 SDS -PAGE盤狀電泳進行尿蛋白分離,該法具有局限性,耗時,操作繁瑣,標本要求高,尿液需預(yù)濃縮,不適于臨床實驗室廣泛開展。 SDS -AGE電泳不需預(yù)濃縮,尿蛋白電泳后呈現(xiàn)出中、高分子量蛋白區(qū),帶主要反應(yīng)腎小球病變;呈現(xiàn)出低分子量蛋白區(qū)帶,可見于腎小管病變及溢出性蛋白尿;混合性蛋白尿則可見到大、中、小各種分子量區(qū)帶,示腎小球及腎小管均受累及。掃描儀可對電泳后尿液中蛋白質(zhì)剖象進行掃描,求出百分比,以顯示腎小球或腎小管損傷程度,其電泳圖譜及掃描圖形可作為資料永載,利于分析比較。該技術(shù)的最大進步是尿液不需預(yù)濃縮,操作簡便,結(jié)果清晰,僅需三小時即可完成試驗,還備有完整的定性標準,易于量化,便于分析,對腎臟疾的診斷,鑒別診斷,指導(dǎo)治療和判斷愈合頗有價值。



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