分子雜交技術
核酸分子雜交技術是分子 生物 學領域中最常用的基本技術之一,其基本原理是具有同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下(適當溫度和離子強度等)按堿基互補原則退火形成特異性雙鏈。根據雜交對象的不同可以分為DNA/DNA的雜交即Southern blotting ;RNA/DNA雜交即Northern blotting。Southern blotting是一種利用放射性標記的探針與靶DNA進行雜交的技術,是以它的發明者E.Southern命名的,即質粒或基因組DNA酶切后經瓊脂糖凝膠電泳分離后轉到硝酸纖維素濾膜,然后再用 32 P標記的探針進行雜交的過程。Northern blotting是將RNA電泳分離后轉移轉硝酸纖維素膜或尼龍膜上,與DNA或RNA探針雜交的一種核酸分子雜交技術。 核酸分子雜交具有高度特異性和高靈敏性,使得核酸分子雜交技術在分子 生物 學被廣泛應用于基因克隆的篩選和酶切圖譜制作、基因組中特定基因的定量和定性的檢測,基因突變分析以及疾病的診斷等。現在常用的是固-液雜交,即模板DNA固定在固體硝酸纖維素膜或尼龍膜上,而探針游離在雜交緩沖液中的雜交。其一般程序圖9所示。
雜交體系中含標記的探針、轉移到膜上的含靶序列的DNA或RNA分子、雜交緩沖液等。
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