葡萄糖－1－磷酸的制備及其純度的測定

一、實驗目的
掌握葡萄糖－1－磷酸的制備及純度的測定方法。
二、實驗原理
淀粉在磷酸鹽存在下經(jīng)過磷酸化酶的作用，分解生成磷酸己糖，

其第一個產(chǎn)物為葡糖—l—磷酸(簡稱G-1-P)。
反應過程如下：

保溫后，將混合物加熱煮沸，使蛋白質變性，破壞磷酸化酶以終止酶促反應。在酸性條件下用2倍體積乙醇沉淀無機磷酸鹽等雜質．然后在堿性情況下(pH8.4)，得G—l—P 鉀鹽沉淀。精制后通過測定有機磷含量來計算純度。
三、儀器和試劑
儀器
絞肉機、抽濾瓶、恒溫水浴、pH 計、布氏漏斗、普通離心機 、塘搪瓷盤、馬鈴薯。
試劑
1. 鎂—銨溶液：稱取20g 氯化銨，l0g 氯化鎂溶于l00mL 蒸餾水中，再加少量氨水至有明
顯氨味。
2. 磷酸二氫鉀
3. 磷酸氫二鉀
4. 可溶性淀粉
5. 磷酸(85％)
6. 甲苯
7. 碘—碘化鉀試劑稱取58碘，l0g 碘化鉀溶于100mL 蒸餾水中。
8. 乙醇(95％以上)
9. 定磷用試劑：3mol/L 硫酸∶水∶2.5%鉬酸銨∶10%抗壞血酸=1∶2∶1∶1（體積比）配制時按上述順序加試劑。溶液配制后當天使用。正常顏色呈淺黃綠色，如呈棕黃色或深綠色不能使用，抗壞血酸溶液在冰箱放置可用1個月。
10. 酚酞指示劑
11. 2mol/L 鹽酸
四、操作步驟
(一)磷酸化酶的制備
磷酸化酶廣泛地存在于動植物 及微生物體內，植物中如豌豆、大豆、馬鈴薯等都是磷酸化酶的極好的來源。本實驗以馬鈴薯為材料提取此酶。
將馬鈴薯洗凈(不用削皮)，在1～5℃預冷約24h 后，切成約1cm 見方的小塊。稱取約300g 馬鈴薯塊，放在絞肉機中絞碎。將攪碎的馬鈴薯漿液放入大燒杯內，置冰浴中冷卻．防止酶的破壞。向燒杯巾加入50mL 冰冷的蒸餾水，攪拌15min。此過程可能出現(xiàn)一些白沫。注意不應過于劇烈的攪拌，以防酶過多變性。將馬鈴薯漿液用紗布過濾，將濾液擠入預先放在冰浴中的燒杯內，即得60～70mL 粗酶液。最初酶液為白色，乳狀，在空氣中暴露，顏色逐漸變?yōu)楹诤稚Ｗ詈弥苽浜罅⒓词褂茫苑烂缸冃浴?/span>

北京天優(yōu)福康生物科技有限公司

官網(wǎng)：http://m.jyzjsd.com/

服務熱線：400-860-6160 

聯(lián)系電話/微信：13718308763  

QQ:2136615612      3317607072

E-mail：Tianyoubzwz@163.com