MEM培養(yǎng)基的配制步驟

1配置前準(zhǔn)備：配置培養(yǎng)基新制備的milli water。調(diào)節(jié)pH值的酸堿溶液也應(yīng)該使用這種水配置。制備培養(yǎng)基的器皿清洗干凈，并用milli water潤(rùn)洗兩次。

2.溶解培養(yǎng)基：取5%終體積的milli water，加入到1L玻璃杯中，將干粉培養(yǎng)基倒入燒杯，水洗包裝袋內(nèi)面兩次，倒入培養(yǎng)液中。磁力攪拌助溶。

3.補(bǔ)加試劑：根據(jù)包裝袋說(shuō)明加入NaHCO3(2.2g)，HEPES(2.383,10mmol)、非必需氨基酸(可不加，10ml)。

4.加抗生素：一般抗生素終濃度——青霉素100U/ml，鏈霉素100U/ml。1L加入10m儲(chǔ)備液。

5.調(diào)pH值：加水到1000ml，然后用HCL或者NaOH調(diào)節(jié)pH到7.2.

6.過(guò)濾除菌：采用0.22um濾膜。過(guò)濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。過(guò)濾后pH值一般上升0.1-0.3.

7.加小牛血清：根據(jù)培養(yǎng)基配置的量將小牛血清分裝，冷凍保存(-20度)。臨用前將加入小牛血清10%。