細胞培養基中的添加劑及其作用
細胞培養基的配制 細胞培養相關用品 細胞培養專題
· 培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM 或M199中同樣很容易生長。總之，首選MEM做粘附細胞培養 ;RPMI-1640 做懸浮細胞和人白血病細胞單層培養是一個好的開始，它也廣泛應用于哺乳動物 細胞和雜交瘤細胞的培養，如人骨髓瘤細胞、鼠雜交瘤細胞、人白細胞以及B細胞和T細胞;各種目的無血清培養最好首選AIM V(12005)培養基(SFM)。選擇細胞的培養基也可以到ATCC上查詢，ATCC (American Type Culture Collection) 收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cell s and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養和凍存條件，以及相關文獻等資料。
同一種培養基也會因其添加物的不同而應用于不同的細胞培養和不同的實驗需求，下面就詳細介紹下培養基中各種添加劑的功能。
1. L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?
是細胞生長的必須氨基酸，為培養的細胞提供重要的能量來源。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解，降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
2. GlutaMAX-I是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩定?
GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。
3. 培養基中丙酮酸鈉的作用是什么?
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
4. Hank′s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別?
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks′液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagle′s液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基 中儲存的組織，用Hanks′液就可以了。
5. 培養液pH對細胞生長的影響?
由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同，原代培養 細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時，需要注意一點：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。
6. 培養細胞時應使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響?
答：一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統，而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5g 時，則應使用5%CO2培養細胞。
7. Hepes的作用
HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養基pH迅速變動。在開放式培養條件下，觀察細胞時培養基脫離了 5%CO2的環境，CO2氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持pH7.0左右。一般在進行克隆 化培養時要添加HEPES。神經細胞 原代培養的過程中能用到
8. NaHCO3
培養基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統，并采用開放培養，使細胞代謝產生的CO2及時溢出培養瓶，再通過穩定調節溫箱中CO2濃度(5%)，與培養基中的NaHCO3處于平衡狀態，從而調節培養基的PH值。
9. NEAA：非必須氨基酸
NEAA(非必需氨基酸)是含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到的原培養基不同，NEAA也有不同的種類，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、 L-Aspartic Acid、L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。
10. 氯化鈣
氯化鈣對成骨細胞培養有毒性，所以成骨細胞的培養基中應不含氯化鈣。
11. 什么培養基中可以省去加酚紅?
酚紅在培養基中用作pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質量并不會產生影響，可以通過純化技術去除，但酚紅在無血清培養基可能帶來胞內鈉/鉀失衡，影響細胞生長，當然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養基中必需的一種成分，很多國外的疫苗或抗體生產企業在生產過程中都使用無酚紅培養基。
研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，(特別是雌激素)。為避免固醇類反應，培養細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養基。
