牙周膜細胞和牙髓細胞的培養方法

牙髓細胞的培養

1、  培養用液：

PBSA ；

膠原酶： I 型，用 D － Hank’s 液配制， 625U/ml ；

培養液： DMEM ＋ 10 ％ FBS ；

2、  Protocol ：

u       取拔除的正畸牙或阻生牙（年齡小者較佳），盡量完整的取出牙髓，置于培養皿中，用 PBS 沖洗；

u       將牙髓放入離心管，加入膠原酶 2 － 3ml/ 牙， 37 ℃ ， 2 － 3 小時（原則是將牙髓消化徹底 ）；

u       加入等量培養液，吹打至單細胞，離心，重懸，接種，牙 /6well ；

 牙周細胞的培養

1、  培養用液：

PBSA ；

膠原酶： I 型，用 D － Hank’s 液配制， 625U/ml ；

培養液： DMEM ＋ 10 ％ FBS ；

2、  Protocol ：

u       取拔除的正畸牙或阻生牙（年齡小者較佳），置于培養皿中，用手術刀仔細刮除附著在牙根上的牙齦組織，然后用 PBS 反復沖洗，以去除殘余組織以及牙根表面的血細胞；

u       將牙放入離心管，加入膠原酶 2 － 3ml/ 牙， 37 ℃ ， 1 小時；

u       加入等量培養液，仔細吹打牙根表面，收集細胞，離心，重懸，接種，牙 /6well ；

* 培養獲得的細胞是牙周膜細胞和成牙骨質細胞的混合體 !

PS ：

u       年齡對細胞產量以及活力影響較大，最好選用年齡在 10 － 14 歲之間的正畸牙或阻生牙；

u       如果選用大鼠牙齒作為培養目標，培養液應稍作調整，基本原則是抑制細胞的衰老，具體做法是：適當降低血清濃度（選用進口血清最佳 ），如果降低血清濃度后，細胞增殖減慢，可加入促進細胞增殖的因子（例如 BPE 25ug/ml 等 ）。