細胞介導細胞毒作用檢測法7：單細胞CMC試驗
單細胞 CMC 試驗
1． 用細胞培養液等量混合效應細胞和靶細胞， 30 ℃水浴 10 分鐘。室溫中 250 × g 離心 5 分鐘，去上清液。同量靶細胞不加效應細胞同樣處理作為對照。
2． 用少量細胞培養液輕輕懸浮細胞，吸管上下吹打 5 ～ 6 次。這一分散細胞的步驟關系到試驗的準確性和重復性，應當設法保持技術的一致性。取少許細胞懸液，稀釋后直接在顯微鏡下計數效應細胞和靶細胞的結合率，即平均每 100 各淋巴細胞中結合了靶細胞的效應細胞的數目。
3． 其余的細胞懸液與等量液態（ 37 ℃）的 0.5 ％低熔點瓊脂糖混合均勻，鋪在培養皿中，厚度≤ 2mm 。固化后小心加入適量細胞培養液覆蓋瓊脂糖層，置 37 ℃ 5 ％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養 1 ～ 4 小時。
4． 吸去培養液，加入適量 0.1 ％臺盼藍覆蓋瓊脂糖層，室溫染色 5 分鐘。吸去染色液，加入適量 0.2 ％甲醛覆蓋瓊脂糖層，室溫固定 5 分鐘。
5． 在顯微鏡下死亡細胞呈藍色，計數靶細胞的死亡率。靶細胞的自發死亡率可以從經同樣處理的靶細胞對照培養皿中測得。如區分效應細胞和靶細胞有困難，可以用雙醋酸熒光素染色加以區分。鏡下計數。
