哺乳細胞雙熒光素酶報告質粒介紹
一、推薦質粒:
pmirGLO載體:報告基因是Fluc,內參基因是Rluc,
psiCHECK-2載體:報告基因是Rluc,內參基因是Fluc,
二、基本應用:
1、啟動子結構分析:將啟動子區域的序列進行分段截短,或者對特定位點進行突變,再分別構建到報告載體,檢測啟動子的活性。
2、驗證特定轉錄因子同其調控作用:將調控序列插入到報告載體中,同時共轉過表達轉錄因子,通過分析熒光素酶的表達反映轉錄因子過表達是否影響基因的表達。
3、驗證microRNA靶向調控序列:將待驗證序列插入報告基因載體的3’UTR區域,再共轉microRNA;如果熒光素酶表達下降,則待驗證序列就是microRNA靶序列。
4、驗證信號通路中的轉錄因子:將該信號通路的下游相應原件序列構建入報告基因載體,檢測不同上游條件下,其熒光素酶活性,即下游信號通路的響應情況。