MLST
多位點序列分型(multilocus sequence typing, MLST)是一種基于核酸序列測定的常規細菌分型方法。該方法由多位點酶電泳(multilocus enzyme electroiphoresis, MLEE)方法發展而來,通過直接測定細菌表達代謝相關酶的管家基因(House-keeping gene)的核苷酸序列,分析細菌進化和群體生物學特征,從而進行分型。
MLST一般測定6-10個管家基因內部400-600bp片段的核苷酸序列,每個位點的序列根據其發現的時間順序賦予一個等位基因編號,每一株菌的等位基因編號按照指定的順序排列就是其等位基因譜,即是這株菌的ST(sequence type)。這樣得到的每一個ST均代表一組單獨的核苷酸序列信息,通過比較ST可以發現菌株的相關性。
MLST分析方法:針對管家基因設計引物對其進行PCR擴增和測序,得出每個菌株各個位點的等位基因數值,然后進行等位基因圖譜(allelic profile)或序列類型(sequence types, STs)鑒定,再根據等位基因圖譜使用配對差異矩陣(matrix pair-wise differences)等方法構建系統樹圖進行聚類分析。實際運用中,對于已有的成熟MLST方案的細菌,可直接從MLST數據庫中獲取分型方案。
MLST可以準確地記錄細菌基因水平上的變異,并且核酸序列容易獲取,所以該方法不僅被用于研究細菌的流行病學、群體生物學、致病性和進化,而且還可以用來追溯耐藥菌株的來源和傳播。