地高辛標記探針的信號放大
材料與儀器
10μg ml 羊抗地筒辛抗體 Fab 片段 溶于 4×SSC 1% m VBSA (組分V) 地高辛信號放大溶液:3. 5?7. 0 ug ml熒光素標記的兔抗羊IgG (Sigma) 溶于 4×SSC 1% m V BSA (組分 V)
Parafilm 膜 玻片
步驟
1) 用地高辛標記的探針與切片雜交并洗片。
2) 加50μL 10 /ng/ml的羊抗地高辛抗體Fab片段于玻片上,蓋以22 mm2大小的Para- film 膜,置 37℃溫育 30 min。
3) 移去Parafilm 膜,分別在 4×SSC、0.1 % Triton×-100/4 ×SSC、4×SSC 中洗片, 每次15 min。
4) 吸去殘余4×SSC,加50μL地高辛信號放大溶液于玻片上,蓋以22 mm2的Para- film膜,放加濕盒中。加濕盒外裹以鋁箔,置37℃溫育30 min。
5) 重復步驟3洗片。
6) 復染,固定并鏡下觀察結果