細(xì)胞浸潤生長性檢測實(shí)驗(yàn)
原理
浸潤性生長是細(xì)胞浸入或穿透其它組織增殖生長能力,浸潤生長性檢測是檢測癌性細(xì)胞的一項(xiàng)有意義的指標(biāo)。檢測方法需用其它正常組織和癌細(xì)胞共同培養(yǎng),觀察癌細(xì)胞向正常組織浸潤生長的情況。
材料與儀器
雞胚
Bacto瓊脂 Eagle 緩沖液 小牛血清 福爾馬林 Hanks液 碘酒
玻璃圈 CO2溫箱 培養(yǎng)皿 平皿蓋 手術(shù)剪 手術(shù)鉗 離心機(jī) 注射器 燒杯
步驟
常用雞胚皮膚或心肌組織塊,作為被浸潤生長的對象;今以雞胚皮膚為例,培養(yǎng)過程如下
1. 程序
(1)雞胚浸出液制備
(2)瓊脂層制備
1 %Bacto瓊脂(用不含NaHCO3的Eagle緩沖液配)10 分
小牛血清 4 分
雞胚浸出液 4 分
(3)雞胚皮培養(yǎng)
無菌從10 天胚齡雞胚背部取皮,切成6~8mm3小塊;每皿中置2~3 塊,貼在瓊脂層表面;
(4)取內(nèi)徑6 mm,厚2 mm的無菌小磁杯或玻璃圈(硅橡膠圈亦可),套在雞皮小塊上;
(5)共培養(yǎng)
向每個(gè)小磁圈中加入25~30 ul 細(xì)胞懸液(含104個(gè)細(xì)胞的2 倍培養(yǎng)液),蓋上平皿蓋,置37 ℃CO2溫箱中培養(yǎng);
(6)補(bǔ)液
次日再向每個(gè)環(huán)中補(bǔ)加2 倍培養(yǎng)液2.5 ul;
(7)切片觀察
第4 天挖取出雞皮塊,10%福爾馬林固定,常規(guī)包埋、切片、染色、光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞對雞胚皮膚浸潤的情況。
2. 結(jié)果
如癌性細(xì)胞已浸入雞胚皮膚內(nèi),說明該細(xì)胞具有浸潤生長能力。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)避免細(xì)菌感染,如癌性細(xì)胞已浸入雞胚皮膚內(nèi),說明該細(xì)胞具有浸潤生長能力。
常見問題
雞胚浸出液內(nèi)含有生長因子、大分子核蛋白和小分子氨基酸等,有刺激細(xì)胞生長作用,為早年培養(yǎng)使用的培養(yǎng)用液,現(xiàn)已被合成培養(yǎng)液所代替,但在某些研究中仍有一定應(yīng)用價(jià)值。
來源《組織培養(yǎng)和分子細(xì)胞學(xué)技術(shù)》