培養(yǎng)細胞的染色實驗-Giemsa染色法
原理
Giemsa 染色是最常用的方法之一，它簡便、快速，適用于多種細胞和染色體染色。
材料與儀器
Giemse 甘油 甲醇 Sorensen
滴管 玻璃片
步驟
1. 染液制備
（1）稱Giemse粉0.5 g、甘油22 ml，在研缽內(nèi)先用少量甘油與Giemsa充分混合，研磨至無顆粒；
（2）再將剩余甘油混在一起；56 ℃保溫2 小時后，加入33 ml純甲醇，保存于棕色瓶內(nèi)。
2. 染色步驟（以蓋片培養(yǎng)法或涂片法為例）
（1）用pH6.8~7.38的Sorensen緩沖液，按1：9 比例取Giemsa染液和Sorensen緩沖液混合配成染色液；
（2）細胞標本用甲醇固定10 分鐘，或1：3醋酸/甲醇固定30 分鐘，用滴管把染色液布滿玻片上（注意不要有氣泡，用染色缸染色亦可）；
（3）染10~15 分鐘后，用自來水沖去玻片上多余的染料，空氣干燥、二甲苯透明、光學樹脂膠封固。
3. 結果
胞核染成紫紅色或藍紫色，胞漿染成粉紅色。
注意事項
1. 染色液宜現(xiàn)用現(xiàn)配，保存時間最好不超過48 小時，舊染液染色效果不好。
2. Giemsa 對pH 極敏感，緩沖液pH 值要調(diào)準確，否則染色效果不好。
3. 用染色缸染色時，隨染色時間的延長，在染液表面常形成一層氧化膜（發(fā)亮），這層氧化膜易附在片上形成污穢，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是現(xiàn)配者時，染色前應先用小片濾紙刮除液面的氧化層再進行染色。
4. 染色完畢，應把標本浸入水中洗除染液，或用自來水直接沖掉多余染液。
