Tau 蛋白硫磺素T檢測操作步驟

材料與儀器

材料：硫黃素 T、PBS、蒸餾水、肝素、0.2μm 注射器過濾器、96 多孔孔板

儀器：移液器、全波長熒光型酶標儀、震蕩孵育器

步驟

1.在蒸餾水中制備 1mM 的硫黃素 T 儲備液 (需是新鮮制備并用 2μm 注射式過濾器過濾)。

2.然后用 PBS pH7.4 將每個孔中的硫黃素 T 儲備液稀釋至最終濃度為 25μM (每孔容量 = 100μL)。

3.向每個孔中加入 10uM 肝素。

4.將分裝小份的 tau 蛋白在使用前于 37℃ 下進行解凍。

5.將原纖維或單體 (或兩者都有) 加入到合適的實驗孔中. 用移液器上下吸放混合孔中物質。

6.將孔板密封并放置于震蕩孵育器上(800rpm)，溫度為 37℃。

7.用全波長熒光型酶標儀讀取熒光讀數。

8.再次將孔板密封放置于震蕩孵育器上, 溫度為 37°C。

9.在 1 到 72 小時之間的固定間隔讀數。

注意事項

酶標儀參數設置:

溫度: 37°C

讀取形式: 孔板掃描

波長: 激發光 450nm，發射光 485nm

PMT 增益: 自動

閃光每讀: 6

震蕩: 讀數前 20 秒