藥用植物過氧化物酶同工酶分析及活性比較實驗

原理

不同種乃至不同變種的生物不但外部形態有變異，由于結構基因的差別，其表達產物酶和蛋白質也必然存在著一定的差別。所以同工酶分析作為一種遺傳分析手段已廣泛應用于品種資源調查、雜交子代測定、種子純度鑒定等農林業各個領域，在指導生產方面發揮了很大的作用。此外，同工酶分析對研究不同產地、不同種屬生物間的親源關系和開發利用藥物植物資源方面也有積極的意義。

材料與儀器

愈創木酚
聯苯胺 冰乙酸 乙酸鈉 硫酸錳 過氧化氫 TMEM 過硫酸銨 瓊脂
電泳儀 垂直板電泳槽 微量加樣器 燒杯 試管 長滴管 平皿

步驟

1.樣品液制備:取材料莖部1 g加兩倍冷純凈水，在冰箱預先冷卻的研缽中充分研成勻漿，然后離心（3500 r/ min，20 min），加等體積甘油和少許溴酚藍指示劑即可。
 
2.凝膠制備（按“常規聚丙烯酰胺凝膠電泳”），加樣量40μl/孔，電壓180 V，電泳時間2.5～3 h。
 
3.染色:0.5 g聯苯胺溶于250 ml 10%冰乙酸，配成聯苯胺母液。1.35 g愈創木酚溶于250 ml 10%冰乙酸，配成母液。染色液為100 ml 0.2mol/L乙酸鈉溶液，10 ml 5 mmol/L硫酸錳溶液，25 ml聯苯胺母液，40  ml愈創木酚母液，25 ml 0.12%過氧化氫溶液（臨用前配制）。凝膠洗出后轉移至染色液中，37 ℃恒溫下放置30 min，顯色后，置7%乙酸中保存，繪圖或照相。