原代細胞分離培養及實例應用
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。原代細胞的培養也叫初代培養是從供體取得組織細胞在體外進行的首次培養，是建立細胞系的第一步，是一項基本技術。原代細胞最接近和最能反映體內生長特性，適宜用于藥物敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
原代細胞的分離與培養方法：
1. 組織塊培養法
組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶（或皿）中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
2. 消化培養法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和 非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀 變成 絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠 瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。
3. 懸浮細胞培養法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。
4. 器官培養
器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。
應用實例
一.大鼠神經元細胞（酶消化法）
簡述：新生24h或E18胎鼠，取腦，剝離海馬，剪碎，木瓜酶消化，清洗過篩后鋪于多聚賴氨酸包被的培養板中。
二.大鼠雪旺細胞（植塊法）
簡述：新生24h大鼠，取坐骨神經，剝去外膜和束膜，剪成1mm3的小塊，均勻鋪于培養皿內，加少量血清，37℃ CO2培養2h后，再加入培養基，24-48h后有細胞爬出。
三.家兔陰莖海綿體平滑肌細胞（消化后植塊法）
簡述：新鮮陰莖標本立刻在0 ～4 ℃Hanks 緩沖液及含少量DMEM 的液體中清洗，鋒利刀片盡快切除皮膚、白膜、尿道及尿道海綿體等組織，將陰莖海綿體組織塊移入含 DMEM培養液的培養皿，把組織塊切割成1 mm ×1 mm ×1 mm 碎屑塊， 并移入無菌錐型管，加入Hanks 緩沖液沖洗，去除粘附于組織塊上的細菌， 再以25 ml 37 ℃預熱的DMEM 培養液沖洗碎屑1 次。隨后將組織碎屑放入6 孔、35 mm 的 細胞培養皿， 每孔4 ～ 5 塊組織碎屑， 使組織塊貼壁， 每孔注入4 ml DMEM 培養液， 小心置入37 ℃、5 %CO2 、95 %空氣的細胞培養箱。一般2~3天就有細胞游離出來。
注意事項
1. 取材的組織要盡快培養。如若不能及時培養，可將組織浸泡于培養液內，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時間不能超過24h。
2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區域取材，可用含500～1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養。
3. 組織塊不易貼壁，可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
4. 原代培養的1～2d內要特別注意觀察是否有細菌、真菌、霉菌的污染，一旦發現，要及時清除。
原代細胞的應用前景：原代細胞在細胞學研究、遺傳學研究、腫瘤研究、藥物篩選、細胞移植、類器官培養等眾多領域備受歡迎，且原代細胞在生物醫藥領域的應用市場前景廣闊。
