飽食和饑餓家兔肝糖原含量的比較
【實驗目的】
1. 掌握肝糖原提取的原理和方法。
2. 掌握定性比較飽食和饑餓家兔肝糖原含量的原理和方法。
【實驗原理】
糖原是葡萄糖在機體內的重要儲存形式之一。主要儲存在肝細胞和肌細胞內，分別稱為肝糖原和肌糖原，其中肝糖原儲存量約占肝重的5％，肌糖原儲存量約占肌重的2％~3%。肝糖原儲存量雖不多，但在代謝過程中，它是機體內糖的重要來源之一。其合成或分解對血糖濃度的調節起著重要作用。許多因素可影響肝糖原的含量。如飽食后肝糖原增加，饑餓時肝糖原逐漸降低。
提取糖原是將新鮮的肝組織與石英沙及三氯醋酸共同研磨，當肝組織充分破碎后，其中的蛋白質被三氯醋酸所沉淀，而糖原仍留于溶液中。過濾除去雜蛋白。糖原不溶于乙醇，在上清液中加入乙醇溶液，糖原從溶液中沉淀析出。糖原是高分子 化合物 (分子量約400萬)，微溶于水，將離心后沉淀的糖原溶于水，溶液呈乳樣光澤，即為糖原溶液。糖原無還原性，遇碘呈紅棕色，經酸水解可生成還原性的葡萄糖。將糖原溶液的一部分作碘的顏色反應，另一部分經酸水解成葡萄糖后，用斑氏(Benedict)試劑檢驗。利用上述性質，進行飽食與饑餓家兔肝糖原的比較。
【器材和試劑】
1. 器材 勻漿機、離心機 、臺秤、試管及試管架、燒杯、水浴鍋、白瓷板。
2. 試劑
（1）5%三氯醋酸溶液。
（2）0.3%碘液。
（3）95%乙醇。
（4）20%NaOH溶液。
（5）濃鹽酸溶液。
（6）班氏定性試劑。
【操作步驟】
1. 在勻漿機中加入適量5%三氯醋酸溶液。
2. 將家兔（饑餓和飽食）快速殺死，剖腹取出肝臟，迅速以濾紙吸去附著的血液后，將饑餓和飽食家兔肝臟分別放入勻漿機制備肝勻漿（因為肝臟離體后，肝糖原會迅速分解。因此在殺死動物后，所得肝臟必須迅速以三氯醋酸處理以防分解）。
3. 沉淀，過濾，棄去雜蛋白，濾液分別收集于燒杯中備用，觀察并比較兩種溶液渾濁程度。
4. 分別于饑餓和飽食家兔肝勻漿濾液中取濾液4ml，加入等體積95%乙醇，充分混勻后，離心3min（3000r/min），比較兩管糖原沉淀量。
5. 小心傾去上清液，于每管各加入蒸餾水5ml，加溫，至沉淀溶解，即為糖原溶液。
6. 取試管3支，編號，按下表操作：
混勻，觀察并記錄顏色，進行比較。
7. 取試管2支，各加入饑餓家兔或飽食家兔肝糖原溶液2ml，每管加入濃鹽酸10滴，置沸水浴中水解約10min，取出冷卻，然后用20%NaOH中和（約20滴），此即為肝糖原水解液。
8. 取試管3支，編號，按下表操作：
混勻，置沸水浴中3min，觀察記錄顏色及沉淀量。
【思考題】
1.在殺死實驗動物后，離體肝臟為什么要迅速用三氯醋酸處理?
2.在提取肝糖原實驗中，使糖原從溶液中沉淀析出應添加什么試劑?
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