熒光原位雜交介紹
熒光原位雜交方法是一種物理圖譜繪制方法，使用熒光素標記探針，以檢測探針和分裂中期的染色體或分裂間期的染色質的雜交。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世紀80年代末在放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合,雜交后再通過免疫細胞化學過程連接上熒光染料[1,2].FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯的單克隆抗體與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.
對于利用rRNA的熒光原位雜交來說，如下原因可導致較低的熒光信號強度：
較低的細胞核糖體含量
較低的細胞周邊的通透性
較低的目標序列可接觸性（由于rRNA的折疊產生的構象，有些位置與rRNA分子內其他鏈或其他rRNA或蛋白緊密接觸，從而使探針無法和目標序列雜交）
為檢驗細胞中的目標序列是否容易被探針雜交，及測試最佳雜交溫度，可利用“克隆熒光原位雜交”(clone-FISH)進行試驗：將rRNA基因結合入質粒，轉化至大腸桿菌中表達，構成核糖體，再用熒光標記的探針雜交。
FISH可與流式細胞術聯用，對特定熒光標記的細胞進行計數或者分離。
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