復雜樣品的分離分析
引言：
隨著現代科學技術的進步，尤其是分子生物學和計算機的推動，當前分析科學取得長足的進步，各種新的分析 儀器 和方法無論在適用性和靈敏度方面都有很大的發展．過去需要幾年才能測定的蛋白質結構，現在幾個小時就可以迅速測定，人類基因圖譜的完全測定曙光已在眼前。采用高效毛細管色譜(包括毛細管電泳)很快分離上百個成分已不是困難的事，色譜和各種結構測定手段的在線聯用，使得無論對已知化合物的在線監測，還是對未知混合物的分析能力都大為增強。目前分析化學正在生命科學、環境科學、材料科學、藥物學等前沿領域發揮極大的推動作用．但是隨著這些學科的不斷發展，分析樣品正變得越來越復雜。分析任務也變得越來越艱巨．進入21世紀，人們將逐漸告別單一組成的分析，越來越多地面臨復雜樣品的分離分析，組成一結構一功能將是人們關心的焦點，復雜樣品將是擺在人們面前的分析難題．
一．復雜樣品分析的基本思路
復雜樣品是指組分種類多、含量差別大、已知信息少．幾乎為一黑箱的復雜混合物。這樣的樣品在生物、環境、材料中占大多數．例如中藥提取物或環境污染物．來源于自然界，常常含有從無機到有機、從離子性、強極性到非極性、從小分子到大分子、從位置異構體到對映體、從常量到痕量的上百種成分，而且這些成分大都是未知的．即使是曾被發現的成分，也很難獲得純品或對照品，與大量未知物混于一體，無異于未知化食物。
復雜樣品的分析，首先需要弄清組成這一樣品體系的各種組成及其比例關系，了解組成這一體系的基本組分分布，在此基礎上，還需對每一組成進行詳細了解，如結構確定，為最終闡明組成一結構一功能提供依據(或根據組成一功能關系．先確定有效組成，再確定這些有效組成的結構)．因此，對復雜樣品的分離分析，可按三個層次進行研究：
(1)利用高效色譜進行復雜混合物的系統分離分析，獲得基本組成色譜峰及其比例關系：
(2)混合物組成成分的結構鑒定，這包括離線各種光譜、質譜的綜合鑒定及色譜和各種技術的在線聯用，尤其是聯用技術不僅可以進行快速簽定，而且由于減少了處理步驟，避免了處理過程造成的組分損失，因此具有更高的定量可靠性，對含量少的組分也可以進行定性(這些含量少的組分是比較難于得到純品的)；
(3)盡管高效色譜和各種光譜、質譜的聯用技術可以極大地促進復雜混合物的分析，但應該看到聯用技術—般要求色譜能分離獲得純色譜峰，才能較好地獲得其光譜、質譜，進行較好的分析．由于樣品組分復雜，在實際分離中即使采用多柱系統在最優化條件下，仍會有大量的不同程度重疊峰，因此，利用先進的算法和計算機，結合色譜和各種光譜、質譜規律，進行多維分析信號與信息的綜合處理，解決重疊峰的解析和定性、定量，最終完成復雜樣品的分析任務．
二．復雜樣品組成的多模式多柱色譜及聯用技術的綜合分離分析
對于復雜樣品的分析，盡管現代高效色譜拄具有很高的柱效，借助于計算機模擬、優化可獲得極佳的分離效果，但由于樣品幾乎包含各類化合物——離子性、強極性、中等極性、弱極性、對映體、揮發油類、大分子、金屬離子和微量元素等，解決此類復雜體系的分離分析，仍需要發展智能多模式多柱系統(1MMlCC)以及色譜與其它技術的聯用．這是因為對于不同的色譜模式．各有其內在的優點，它們各自都有解決特定分離問題的優勢．因此利用不同色譜模式、不同柱子的特性和優勢，取長補短，可以利用不同柱子對樣品組分的選擇性、互補性來達到單模式、單柱子色譜系統所不能解決的分離問題 智能多模式多柱系統及其聯用技術包括高效液相色譜(服LC)、氣相色譜(GC)、毛細管電泳(CE)和各種聯用技術等眾多于段，它利用計算機技術并結合了色譜專家的知識和經驗，是智能的、統一的分析方法．
1 對一些極性有機溶劑提取物可以綜合考慮不同液相色譜方法進行分離分析 通常對于未知復雜混合物的分析，首先采用合適的溶劑進行溶解或提取其中成分進行分離分析研究．根據樣品不同性質可以來用不同極性的溶劑進行溶解和多步提取，獲得其一種或多種樣品成分 對于所獲得的組分，應盡量進行簡單的處理，減少成分損失．利用簡單濃縮，然后過濾宣接利用色譜進行分離分析，充分發展色譜方法，進行復雜混合物的分離分析不失為一種高效的方法．對于未知的復雜樣品提取物，可以根據提取溶劑進行方法的初步發展．對于極性溶劑提取物一般可以利用目前應用比較成熟的反相液相色譜進行分離．柱子選擇以Cls柱為主，根據分離情況可以進行不同C 18 柱及C 8 柱及苯基拄組成多柱系統進行互補分離．一般Q s填料裝填好，技效高，適用性廣，與其它填料相比，Qs填料對各類樣品均有較強的適應能力，因此可以以q8柱作為第一柱．從色譜填料的發展來看，采用少含金屬離子高純硅膠基質作原料，鍵合相均勻，封尾好，殘余硅經基少，碳含量高(＞16％)是目前校子發展的主要方向．另外，細管徑、細粒徑填料(如3仰)可以獲得更高的拄效，具有更強的分離能力，這些都十分有利于復雜樣品的分離分析．在柱子確定之后，流動相的選擇是影響分離的最為重要的因素，流動相選擇的目的是使所有組分流得出、分得開、分析時間最短．甲醇冰體系以其選擇性好．價格便宜，應用最為廣泛，可以作為未知化合物分離時選擇流動相的第一選擇．除此之外，可以選擇乙臘休、四氫映喃冰進行互補分離，并可采用異丙醇／P醇分離部分強保留成分，所有這些流動相可以組成多二元流動相進行互補分離。
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