植物組織中總糖及還原糖的測定—3,5
一、實驗目的：
1、掌握還原糖和總糖測定的基本原理。
2、掌握比色法測定還原糖的操作方法。
二、實驗原理:
1、還原糖：指含有游離的半縮醛(酮)基糖。
單糖都是還原糖；某些二糖是還原糖（如麥芽糖、乳糖等）；多糖為非還原糖。
2、總糖的提取及雙、多糖的酸水解。
利用糖的溶解度不同，可將植物 樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量（還原糖以葡萄糖含量計）。
3、還原糖與3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑反應：
在堿性條件下，還原糖與DNS試劑反應，還原糖被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，DNS被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。
4、在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色物質(3-氨基-5-硝基水楊酸)顏色的深淺成正比關系，利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子 水，所以在計算多糖含量時應乘以0.9。
三、實驗材料、儀器和試劑：
1、實驗材料：食用面粉、大豆葉片
2、儀器：水浴鍋；可見分光光度計 等。
3、試劑：
（1）500μg/mL葡萄糖標準液
（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑(堿性)
（3）6M HCl和6M NaOH
四、實驗步驟：
1、葡萄糖標準曲線的繪制:取7支試管，按下表操作，以標準葡萄糖含量為橫坐標，對應的吸光值為縱坐標，繪制標準曲線。
2、還原糖的提取
①取0.5g樣品于研缽中，加水2-3ml，充分研磨。
②用15ml蒸餾水分三次沖洗研缽，轉入50ml錐形瓶中。
③在50℃水浴中恒溫20分鐘，冷卻后于3000轉離心5分鐘。
④取上清轉入50ml容量瓶中，用蒸餾水定容，待測。
3、總糖的水解及提取
①取0.5g樣品于研缽中，加水2ml，充分研磨。
②用6ml蒸餾水分三次沖洗研缽，轉入50ml錐形瓶中。
③向錐形瓶中加入10mL 6M HCl，沸水浴30分鐘，冷卻后，用6mol/LNaOH調pH值至中性，于3000轉離心5分鐘。
④取上清轉入100ml容量瓶中，用蒸餾水定容，待測。
4、樣品含糖量的測定:
取提取液0.5ml，按上表操作。
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