糖的分離鑒定 ——硅膠G薄層層析法
【原理】
薄層層析是一種廣泛應(yīng)用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪類、糖脂和生物堿等多種物質(zhì)的分離和鑒定的層析方法。由于層析是在吸附劑或支持介質(zhì)均勻涂布的薄層上進行的，所以稱之為薄層層析。
薄層層析的主要原理是，根據(jù)樣品組分與吸附劑的吸附力及其在展層溶劑中的分配系數(shù)的不同而使混合物分離。當(dāng)展層溶劑移動時，會帶著混合樣品中的各組分一起移動，并不斷發(fā)生吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。根據(jù)各組分在溶劑中溶解度不同和吸附劑對樣品各組分的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列的斑點。如果把標(biāo)準(zhǔn)樣品在同一層析薄板上一起展開，便可通過在同一薄板上的已知標(biāo)準(zhǔn)樣品的R f 值和未知樣品各組分的R f 值進行對照，就可初步鑒定未知樣品各組分的成分。
薄層層析根據(jù)所支持物的性質(zhì)和分離機制的不同包括吸附層析、離子交換層析和凝膠過濾等。糖的分離鑒定可用吸附劑或支持劑中添加適宜的黏合劑后再涂布于支持板上，可使薄層粘牢在玻璃板（或滌淪片基）這類基底上。
硅膠G是一種已添加了黏合劑——石膏（CaSO 4 ）的硅膠粉，糖在硅膠G薄層上的移動速度與糖的相對分子質(zhì)量和羥基數(shù)等有關(guān)，經(jīng)適當(dāng)?shù)娜軇┱归_后，糖在硅膠G薄析上的移動距離為戊糖>已糖>雙糖>三糖。若采用硼酸溶液代替水調(diào)制硅膠G制成的薄板可提高高糖的分離效果。如對已分開的斑點顯色，而將與它位置相當(dāng)?shù)牧硪粋€未顯色的斑點從薄層上與硅膠G一起刮下，以適當(dāng)?shù)娜芤簩⑻菑墓枘zG上洗脫下來，就可用糖的定量測定方法測出樣品中各組分的糖含量。
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