轉錄依賴的擴增系統
轉錄依賴的擴增系統(Transcript-based amplification system,TAS),是Kwen等人于1989年研究報道的,主要用于擴增RNA合成A、B引物,引物A的3'末端與待擴增RNA互補,其5'端有T7RNA多聚酶的啟動子信息.逆轉錄酶以A引物為起點合成cDNA;引物B與此cDNA3'端互補合成cDNA第二鏈.逆轉錄酶除具有逆轉錄活性外,還有DNA多聚酶的活性及RNaseH的活性.T7RNA多聚酶又以此雙鏈DNA為模板.轉錄出與待擴增RNA一樣的RNA,這些RNA又可作為下輪反應的模板.T7RNA多聚酶的催化效率很高,一個模板可轉錄10~103個RNA拷貝,因而反應液中待檢RNA的數量以10的指數方式擴增.
TAS的主要特點是擴增效率高,因為其RNA拷貝數呈10的指數方式增加,只需6個循環靶序列的拷貝數就能達到2×106.它的另一個特點是特異性高,由于TAS只能進行6次溫度循環,錯摻率低,加之用葡聚糖珠夾心雜交,因而特異性也高.雖然本法有較高的特異性和敏感性,但其循環過程復雜,需重復加入逆轉錄酶和T7RNA多聚酶,有待進一步研究.
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