種子蛋白質系統分析:種子蛋白質含量測定（凱氏定氮法）
一、目的：
谷物是人類特別是發展中國家人民的主要蛋白質來源，谷物中蛋白質含量是衡量其品質和營養價值的最重要的指標。培育高蛋白谷物品種，是廣大育種工作者的奮斗目標。
對現有谷物進行評價、利用，對大批原始材料（種質資源）及育成品系進行品質篩選，都需要測定種子蛋白質含量。測定種子蛋白質含量的方法很多，一般可分為間接方法和直接方法兩大類。凱氏定氮法是間接方法中的一種，國際谷物化學協會（ICC）、美國分析化學協會 ( AOAC）、美國谷物化學協會（AACC）等及不少國家都把凱氏定氮法定為標準法。通過本實驗學習凱氏定氮法的原理，掌握樣品的處理和自動凱氏定氮儀的操作。
二、原理
根據蛋白質的含氮量比較恒定，平均約為16% ，通過測定樣品的含氮量進而推算蛋白質的含量。種子中的氮化物可分為蛋白氮和非蛋白氮。用三氯乙酸溶出種子粉或脫脂種子粉中的非蛋白氮化物（氨基酸、酞胺和無機氮），沉淀樣品中的蛋白質并使二者分離。在催化劑參與下，用濃硫酸消煮分解樣品，使蛋白氮轉化為氨態氮，并與硫酸結合生成硫酸按。加堿蒸餾，使氨釋放出來并吸收于一定量的硼酸中，再用標準酸滴定，求出樣品中氮含量，乘以16％的倒數6.25 即可換算成蛋白質含量。
三、儀器、試劑和材料
1．儀器
( 1 )分析天平
( 2 )消化護
( 3 )消化管4 支
( 4 )具塞三角瓶100ml x2
( 5 )康氏振蕩機1 臺
( 6 )漏斗2 個
( 7 )吸管10ml X 1, 5mlX 1
( 8 )自動凱氏定氮儀（VS-KT-P 型）
2．試荊
( 1 ) 5％三氯乙酸
( 2）濃硫酸
( 3）混合催化劑硫酸銅：硫酸鉀＝1 : 4 ( W / W )
( 4 ) 40％氫氧化鈉
( 5 ) 4％硼酸
( 6 ) =0.05mol / L 標準硫酸
( 7）混合指示劑 50ml0.1％甲烯藍乙醇溶液與200ml0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中。
四、操作步驟
( 1）用分析天平稱取谷物全粉0.1000g 二份，分別加入2 只l00ml 具塞三角瓶中。
( 2）在三角瓶中加5％三氯乙酸20ml，置康氏振蕩機上振蕩提取（非蛋白氮化物）lh ，過濾，棄濾液。用5％三氯乙酸洗滌濾紙上的沉淀，最后將漏斗里的沉淀連同濾紙一起放入 1、2 號消化管內，在3、4 號消化管內各加1 張相同濾紙，作為空白。
( 3）在1-4 號管內各加適量催化劑及5ml 濃硫酸。置消化爐上，200℃ 消化0 .5h，然后升溫至400℃ 再消化0.5h 。消化液呈清亮、藍綠色。
( 4）待消化液冷卻后，用自動定氮儀進行蒸餾、滴定。儀器可自動打印出結果報告，也可根據儀器給出的標準硫酸消耗體積進行手工計算。
五、結果處理
六、注意事項消化樣品時要注意安全，防止燙傷或損失樣品。
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