地高辛(DIG)產品選擇指南——選擇檢測方法
檢測方法
對于探針和靶序列雜交之后的檢測,我們通常使用堿性磷酸酶(AP)耦聯的抗體,采用顯色法或化學發光法檢測。在堿性磷酸酶的底物中,我們使用CDP-Star或CSPD用于化學發光法檢測,NBT/BCIP用于顯色法檢測。同時,對于膜雜交中的化學發光信號的檢測,建議使用Lumi-Film以獲得最理想的信號。
檢測底物
即用型CDP-Star
堿性磷酸酶作用于CDP-Star底物,產生的光信號被X膠片(例如:Lumi-Film)曝光或是圖像設備采集。與CSPD相比較,CDP-Star的主要特點在于光信號產生的速度更快(10倍于CSPD)同時強度更強,可大量縮短曝光時間。其信號的釋放可以持續大概兩天的時間,因此可以進行多次曝光。化學發光的底物僅僅適用于尼龍膜。
即用型CSPD
堿性磷酸酶作用于CSPD底物,產生的光信號可被X膠片(例如:Lumi-Film)
曝光或是圖像設備采集。由于其同樣具有持續的發光過程,因此也可以進行多次曝光。在尼龍膜上使用CSPD或CDP-Star底物的雜交,還可進行探針的撥離和重探。
NBT/BCIP
使用類似NBT/BCIP顯色底物的好處就在于,檢測的過程中不需要X膠片,既可以使用尼龍膜也可以是使用硝化纖維素膜。然而,如果想要獲得高靈敏度的檢測結果,可能就需要較長的時間了(幾個小時)。這種方法也有其不足之處:首先這種方法只能一次性獲得信號,不能多次檢測;在探針撥離前,需要使用二甲基甲酰胺先將膜上沉淀的顏色去除。
其他的底物和抗體
在整個DIG系統中,還有其他的一些底物和多種熒光抗體,例如Fast Red Tablets, BM Purple, HNPP Fluorescent Detection Set 和DAB POD Substrate ;供不同研究的需要。
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