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單克隆抗體(McAb)親和層析柱純化重組人α2a干擾素
發布日期:2023-03-06 10:06:22


單克隆抗體(McAb)親和層析柱純化重組人α2a干擾素


  • 層析柱的類型及作用

重組人α干擾素作為一種具有廣譜抗病毒、抑制腫瘤細胞生長及免疫 調節作用的細胞因子新型藥物,已在國內外廣泛投入臨床應用,并取得了顯著的療效。國際上對用于臨床的重組干擾素的純度要求很高,美國NIH規定必須在90%以上,因此生產者普遍采用親和層析純化法。我們研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1,與CNBr活化的Sepharose 4B交聯制成親和層析柱,經1年60余次較大規模試用表明具有較理想的親和層析純化rHuIFN-α2a的性能,達到了國內外同類McAb的水平。由于McAb 3F1也能和rHuIFN-α2b結合,故極有可能亦適用于rHuIFN-α2b的親和層析純化。

一、性能指標

1. McAb的特性:IgG1,間接ELISA效價10-7,對rHuIFN-α2a具中和活性。

2. 洗脫的rHuIFN-α2a純度:〉90%。

3. 洗脫的rHuIFN-α2a比活性:≥1×109IU/mg。

4. rHuIFN-α2a的回收率:≥95%。

5. 親和柱的穩定性:4℃操作和保存情況下,使用60余次1年時間性能無明顯下降。

6. 與國外McAb比較:各項指標絕不亞于英國Cell tech公司生產的McAb NK2。

二、操作方法

1. rHuIFN-α2a的粗提:表達rHuIFN-α2a的工程菌用鹽酸胍裂解,過DEAE凝膠柱粗提,收集活性峰。

2. 親和層析:rHuIFN-α2a粗提物用pH7.2,0.15mol/L PBS 透析過夜,上樣于經pH7.2,0.15mol/L PBS平衡的親和層析柱,流速0.5ml/分,然后用大量PBS流洗至流出液OD280≤0.02,再用pH2.4,0.1mol/L甘氨酸-HC1洗脫,洗脫液立即轉至pH7.2,0.15mol/LPBS中透析過夜,測定蛋白濃度、純度和活性。

三、保存方法

1. 親和柱的再生:先后用10個柱床體積、含0.5mol/L NaCl的pH8.5,0.1mol/L Tris-HCl和pH4.5,0.1mol/L醋酸鈉緩沖液流洗親和柱,再用pH7.2,0.15mol/L PBS充分平衡。

2. 貯存:加入1/萬的疊氮鈉防腐,貯存于4℃冰箱。



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