PromoCell MSC分化培養操作步驟
一、向神經細胞分化的操作流程
1、將塑料培養器用纖維連接蛋白包被
根據操作手冊，用纖維連接蛋白（C-43050）包被合適的組織培養瓶。使用濃度為10μg/ml。
2、接種間充質干細胞
用MSC生長培養基（C-28010）在用纖維連接蛋白包被過的培養瓶中接種培養，接種密度為4000個/cm2。
3、培養間充質干細胞
將細胞培養至80%的飽和度，每48小時更換一次培養基。
4、誘導間充質干細胞
用MSCU經細胞分化培養基（C-28015）誘導培養，用MSC生長培養基（C-28010）培養剩余的一個樣本作為陰性對照。
5、間充質干細胞的分化培養
至少培養3天，每48小時更換一次培養基。
注意：誘導后只要1天就觀察到細胞顯著的形態學變化。
6、收獲和驗證細胞
MSC來源的神經細胞可以選擇性的根據的“神經細胞標記物的檢測”來進-步驗證細胞的特征。
二、向成骨分化的操作流程
1、接種充質干細胞
在24組織培養板中用MSC生長培養基接種間充質干細胞，每接種6x104個MSC（接種密度為3.15x104個/cm2）。
2、間充質干細胞的生長
要點：讓細胞達到≥100%的密度（24-72小時）。
3、誘導間充質干細胞
將其中一份培養的細胞用MSC成骨分化培養基誘導，另一份培養的細胞用 MSC生長培養基培養作為陰性對照。
4、間充質干細胞的分化培養
誘導培養14天，每3天更換一次培養基。操作時候小心不要破壞細胞的單層。
要點：在整個染色過程中不要讓細胞在干的狀態下放置超過30秒！
三、向成軟骨分化的操作流程
1、接種間充質干細胞
在96 U型底板中用MSC生長培養基接種間充質干細胞，每接種1x105個MSC。
2、MSC芽體形成
在24-48小時內芽體就會自發形成。
3、誘導間充質干細胞芽體
將其中一份培養的細胞用MSC成軟骨分化培養基誘導，另一份培養的細胞用MSC生長培養基培養作為陰性對照。
4、誘導得到的間充質干細胞芽體的分化培養
誘導培養14天，每3天更換一次培養基。操作時候小心不要吸到芽體。
要點：在整個染色過程中不要讓細胞在干的狀態下放置超過30秒！
四、向成脂分化和操作流程
1、接種間充質干細胞
在24 組織培養板中用MSC生長培養基接種間充質干細胞，每接種6x104個MSC（接種密度為3.15x104個/cm2）。
2、間充質干細胞的生長
讓細胞達到80%-90%的密度（24-48小時）。
3、誘導間充質干細胞
將其中一份培養的細胞用MSC成脂分化培養基誘導，另一份培養的細胞用MSC生長培養基培養作為陰性對照。
4、間充質干細胞的分化培養
誘導培養14天，每3天更換一次培養基。操作時候不要破壞細胞的單層。
要點：在整個染色過程中不要讓細胞在干的狀態下放置超過30秒！
五、MSC無分化生長的操作步驟
用人纖連蛋白溶液進行包被
將纖維連接蛋白用不含鈣和鎂的Dulbecco's PBS(C-40232)稀釋至10μg/ml，用足量經稀釋的纖連蛋白溶液覆蓋組織培養皿的表面，以確保有效的包被整個培養表面。室溫下將培養皿水平放置60分鐘，確保覆蓋整個表面后，吸出多余的纖連蛋白溶液后立即使用，或打開培養容器讓其暴露在層流臺上用氣流吹干。已包被過的未使用容器可在4℃條件下最多保存2周。
按照原代細胞的培養手冊進行解凍培養。
PromoCell MSC DXF培養墓的主要特點：
1、適用于骨髓/臍帶/脂肪來源的MSC
2、在更短的培養時間內細胞擴增更多
3、細胞倍增速度更快
4、作簡便，基礎培養補充劑一次性混合后，即可實現培養
5、更低的接種密度，4000個細胞/cm2
6、在細胞傳代的整個過程中，都可持免疫表型、多能性及對T細胞的抑制能
7、無血清、無動物源性，成分已知
優點：
1、精確控制MSC的類型，自我增殖或定向分化
2、更低的使用成本
3、降低了污染風險
5、簡化注冊申報過程
6、提高患者安全性
7、批次間差異最小化
8、無血清、無動物源性，相關風險最小化
價值定位——傳統培養基相比PromoCell MSC DXF培養基的優勢
1、自主配制類：用于細胞擴增的、化學成分明確的DXF培養基，可在維持多能性表面表型的同時減少批間差異，并且節約時間和精力，可使細胞達到您預期的最終狀態。
2、含血清型類：用于細胞擴增的、化學成分明確的DXF培養基，可在維持多能性和表面表型的同時減少批間差異，并且節約時間和精力，可使細胞達到您預期的最終狀態。
3、不含血清型類：DXF即用型培養基簡化了細胞培養流程并優化了生產率，在每次傳代中，可使細胞的倍增度更高，減少了總成本、時間和污染風險。
4、無異源培養基類：DXF即用型培養基簡化了細胞培養流程并優化了生產率，在每次傳代中，可使細胞的倍增度更高。
FAQ
1、什么是人纖連蛋白溶液？
答：它是一種纖連蛋白細胞外基質，其促貼壁性能可以優化PromoCell MSC DXF培養基及補充劑的培養效果
2、其它纖連蛋白也起作用嗎？
答：是的，但我們不建議將動物源性纖連蛋白用于人體細胞的培養。PromoCell也提供牛纖連蛋白C-43050
3、需要使用人纖連蛋白溶液對培養容器表面進行預處理嗎？
答：需要，因為PromoCell的MSC DXF培養系統中不含促進細胞貼壁的物質，所以培養前建議使用人纖連蛋白（C-43060）對培養容器表面進行預處理。
4、你能給我們提供一份MSC培養基和補充劑成分的清單么？
答：不能，這屬于PromoCell的保密條款
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