孚爾根[Feulgen]核反應染色法

一、實驗目的
學習和掌握孚爾根反應染色法，鑒定植物細胞核 內染色體上DNA的存在。
二、實驗原理
DNA是主要的遺傳物質，集中于染色體 上。1924年孚爾根首先用席夫試劑(Schiff)作試驗，鑒定了染色體上DNA的存在，故稱為孚爾根染色法。孚爾根染色法的反應原理主要與席夫試劑的化學性質有關，此試劑的基本成分是堿性品紅，偏亞硫酸氫鈉(NaHSO3)和鹽酸.堿性品紅的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。
堿性品紅原為桃紅色，當與亞硫酸作用時還原，使醌型變?yōu)楸叫?，由桃紅色變?yōu)闊o色透明的N-亞磺酸亞硫酸副品紅堿，當它與醛基作用時，其分子 式又恢復為醌型結構，呈現紫紅色，其反應式見圖8-1。

利用1N HCl 、60℃ 下水解時，可將DNA分子中嘌呤堿基與去氧核糖之間的糖苷鍵打斷，使嘌呤脫下，并使去氧核糖C-1位置釋放醛基與席夫試劑反應顯紫紅色。細胞中只有DNA才具有這種專一的孚爾根反應，因此利用孚爾根反應，可以鑒定DNA的存在。并廣泛應用于核及染色體的研究中。