如何作好軟瓊脂實驗分析

軟瓊脂(soft agar)實驗一般用來檢測細胞的集落形成能力。現在這種方法越來越多的用于分離癌細胞，也可以用來確認癌細胞是否具有癌化特性，為進一步做腫瘤小鼠移植模型奠定理論基礎。該方法看似簡單，但如果細節掌握不好，往往導致實驗失敗或數據缺乏說服力。如果你曾經在這個實驗上栽了跟頭，請不妨在如下幾個方面進行嘗試：

1.要確保在整個實驗過程中所使用的瓊脂處于完全液體狀態（>80℃），尤其是在做基底時，如果瓊脂凝固過快會導致基底不均一；

2. 做瓊脂基底是應避免產生小氣泡，一旦有小氣泡產生，應該立即將氣泡趕走；

3. 應使用2倍濃度的培養基，并加入20%FBS 和2%的P/S；

4. 在制備上層時，混合液體需要有順序，一般為在同一個移液管中先吸取液態瓊脂，再吸取同體積的2倍濃度的培養基，最后在吸取2倍體積的細胞懸液，這樣既可以保證瓊脂不立即固化，又可以有效避免細胞因溫度過高而燙死；

5. 因為該實驗周期較長，為避免過度蒸發而導致瓊脂裂解，需要保證小環境持久濕潤，一般可在六孔板或培養皿下面墊上三到四層濕潤的薄紙。