高通量細胞篩選技術(shù)(high throughput cell-based screening technology)

高通量細胞篩選技術(shù) (high 2 throughput cell - based screening technology) 是以高通量方式研究基因功能最有效的方法之一。通常 , 基因功能的初步篩選在 96 孔或 384 孔板上進行 , 通過基因轉(zhuǎn)染將候選基因?qū)爰毎?/span> , 或直接將基因表達產(chǎn)物加入細胞培養(yǎng)液中。篩選測定方法基于要研究的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)問題 , 例如 , 要研究抗血管生成活性 , 選用內(nèi)皮細胞進行細胞生長、分化、遷移和粘附等分析測定 ; 研究免疫調(diào)節(jié)活性 , 可選擇淋巴細胞或造血細胞進行細胞生長和分化的分析測定 ; 研究神經(jīng)營養(yǎng)因子活性 , 可選用神經(jīng)細胞進行細胞存活、突起生長測定。除上述與細胞表型或形態(tài)學(xué)相關(guān)的檢測指標外 , 細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、糖代謝、能量產(chǎn)生和代謝產(chǎn)物分析 (metabolic control analysis) 等代謝通路也是基因功能重要的研究內(nèi)容。

　　結(jié)合抗體芯片技術(shù)、多路測定技術(shù) (multiplexing) 等新的檢測方法 [12 ～ 14 ] , 高通量細胞篩選的應(yīng)用更為廣泛。另外 , 隨著熒光成像讀板儀 (fluorescence image plate reader ,FLIPR) 、定量 PCR 、高通量熒光激活細胞分類器 (HT 2 FACS) 等檢測方法和技術(shù)的不斷發(fā)展和應(yīng)用 , 靈敏度和重現(xiàn)性這兩個高通量細胞篩選的關(guān)鍵問題也逐步得以解決。

初篩得到的基因通常選用二級分析模型進行功能驗證 , 驗證方法可能通量略低 , 但與功能的相關(guān)性更強。