大鼠原代腎小管上皮細胞培養方法

取材：1.腎小管節段的分離(機械網篩濾過法)：
①取 Wistar 大鼠斷頸法處死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分鐘。
②將大鼠轉移入超凈工作臺，取腰部切口迅速取出腎臟，置于盛有生理鹽水的培養皿中清洗并除去包膜和腎蒂組織。
③取皮質置于80目篩網上，剪碎成1-2mm3大小組織塊，網下放盛有少量生理鹽水的培養皿。
④用玻璃注射器內芯于80目網上充分研磨組織。
⑤收集 80 目網下液體轉移至 100 網篩上，用生理鹽水沖洗。
⑥將100目網上組織用生理鹽水沖洗入另一培養皿中，收集置入離心管中。1500 轉/分鐘離心5分鐘，棄去上清。
2 腎小管節段的消化及培養
①用1.5ml 0.25%胰蛋白酶重懸沉淀，37℃溫箱中消化約10分鐘。
②加入3ml(雙倍量)含有10%胎牛血清RPMI1640中止消化，1500 轉/分離心8分鐘，棄上清。
③加入約3ml RPMI1640 懸浮沉淀，并用吸管充分吹打混勻，接種于培養瓶中。
④分離腎小管節段接種于培養瓶后，第一天加入少量培養基，置入37℃,5%CO2孵育箱中靜置培養。
⑤培養過夜后，第二天加入足量的培養基，靜置培養。
⑥培養 72 小時后首次換液，以后每兩天換液一次。
⑦約第六到七天細胞生長基本融合成單層。