流式細胞術測效靶細胞殺傷實驗

做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，老外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老了，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術，又方便，又準確，這也是偶參照老外的方法吧。

1　計數靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達到2uM,37度30分鐘。
2　拿出后，1000rpm,5min,可隱約看到細胞染成黃色，PBS洗三次
3　與效應細胞混培，作用4-6小時。
4　將細胞混合液消化取出，洗二次，PI工作液5ul，避光30分鐘后上流式
5　CFSE，PI雙陽性的細胞為被殺傷的靶細胞，除以靶細胞總數，即為殺傷率。

注意事項：
1。CFSE及PI的濃度必須注意，寧低勿高，個人感覺，如果標高的話，在4度放一晚好像會好一些
2。必須設全陰，CFSE單標，PI單標，CFSE＋PI雙標并同步化的靶細胞的參照.
3。作用時間不能太長，不要超過8個小時。