醋酸桿菌的分離純化
醋酸桿菌是一類能使糖類和酒精氧化成醋酸等產物的短桿菌 。細胞橢圓或短桿，0.8-1.2μm× 1.5-2.5μm，單生、成對偶爾成短鏈；細胞端尖或平。革蘭氏陽性。運動，亞極生的單鞭毛或兩根鞭毛。不產芽孢。極端嚴格好氧，化能無機營養，氧化氫、還原CO2生成乙酸。也可營化能有機營養，發酵果糖和其他底物幾乎只產生乙酸。乙酸是代謝的有機終產物。不產生接觸酶。最適生長溫度30℃。廣泛分布于水生環境中 。 模式種：伍氏醋酸桿菌(Acetobacterium woodii)。
醋酸桿菌常存在于醋和醋的食品中。工業上可以利用醋酸桿菌釀醋、制做醋酸和葡萄糖酸等
1、材料
1.1 樣品
取發酵成熟的固體醋醅30g。
1.2 培養基
米曲汁碳酸鈣乙醇培養基或葡萄糖碳酸鈣培養基。
1.3 試劑
1%三氯化鐵溶液，革蘭氏染色液，0.1mol/LNaOH標準溶液，1%酚酞指示劑，無菌水等。
1.4 器皿
平皿，三角瓶，吸管，試管，玻璃珠等。
2、方法與步驟
2.1 富集培養
滅菌后，取500mL三角瓶裝入30mL米曲汁液體培養基（其中含有0.0002%結晶紫和3%-5%的乙醇），加入1-2g樣品經30℃振蕩培養24h，若測定增殖液的pH明顯下降、有醋味、鏡檢細胞革蘭氏染色、形態與醋酸菌符合即可分離。
2.2 傾注法分離
①取增殖液1mL于裝有9mL無菌水三角瓶中（內含玻璃珠數粒），搖勻后，以10倍稀釋法依次稀釋至10-7，然后分別取10-7、10-6、10-5三個稀釋度的稀釋液各1mL置于無菌平皿中，每個稀釋度平行兩個平皿 ；
②熔化米曲汁碳酸鈣培養基，稍冷后加入3%的無水乙醇，搖勻，待冷至45℃-50℃，迅速傾入上述各皿，輕輕搖勻，待凝固后置于30℃，保溫培養2-3d。觀察小菌落的出現，醋酸菌因產生醋酸溶解了培養基中的碳酸鈣，而使菌落周圍產生透明圈，圈的大小因菌而異。
③挑透明圈不同的菌落于米曲汁碳酸鈣乙醇斜面培養基上，30℃培養24-48h。
3、性能測定
將上述各分離株分別接入米曲汁液體培養基中（300mL三角瓶裝有20mL培養基），加無水乙醇至終濃度為5%，30℃振蕩培養24h。
①鏡檢：細胞呈整齊的橢圓或短桿狀。
②醋酸的定性分析：取發酵液5mL于潔凈的試管中，用10%NaOH液中和，加l%三氯化鐵溶液2-3滴，搖勻，加熱至沸，如有紅褐色沉淀產生而原發酵液已變得五色，即可證明是醋酸。
③生酸量的測定：取發酵液1mL于250mL三角瓶中，加中性蒸餾水20mL、酚酞指示劑2滴，用0.1mol氫氧化鈉溶液滴定至微紅色，計算產酸量。
