核酸(DNA和RNA)的細胞核定位觀察
一、實驗目的
1 了解和學習兩類核酸顯示的原理及操作程序。
2 了解細胞中DNA和RNA的分布。
二、反應原理
1.Feulgen反應:
DNA經弱酸(1mol/L HCl)水解后,嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開,并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開,在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。醛基在原位與Schiff(無色品紅亞硫酸溶液)試劑結合,形成紫紅色化合物,使細胞內含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應。
紫紅色的產生是因為反應產物的分子 內有醌基(醌基是一個具有顏色的發色團),所以凡含有DNA的部位,就呈紫紅色。而RNA用此法處理后則分解。反應式如下:
2.Unna染色法:
1899年Pappenheim 首創了甲基綠-哌洛寧(mehtyl-green-pyronim)染色法。1902年Unna對這一方法進行了改良。1940年Brachet研究證明用甲基綠—哌洛寧對DNA和RNA有選擇性的染色效果。堿性的甲基綠-哌洛寧混合染料處理細胞后,由于DNA、RNA對染料具有的親和力不同, 而使這兩種染料對兩類核酸具有了選擇性。 DNA被甲基綠染成綠色,RNA被哌洛寧染成紅色, 這樣就能使細胞中兩種核酸分布顯示出來。