植物有絲分裂臨時制片(壓片法)

一、實驗目的：學習醋酸洋紅染色的具體操作方法，觀察植物根尖的細胞有絲分裂各個時期染色體 的變化及特征。
二、實驗原理（有絲分裂過程同實驗一）
三、實驗材料 蠶豆根尖（2n=12）
四、實驗步驟
1、取材：蠶豆根尖
先將種子浸泡1天，待吸水膨脹后移到鋪有幾層吸水紙的培養皿內，上面蓋兩層濕紗布加不少許，置于18-20℃（黑暗）培養40-50小時。待根長至1-2cm時，于上午10時左右剪取。

2、預處理：目的，使獲得中期分裂相較多的細胞，使染色體縮短，分散，便于壓片觀察。
預處理機理：阻止或破壞紡紡錘體微管的形成，使有絲分裂過程被抑制在分裂中期階段，以便累積較多的處于分裂中期的分裂相；導致chr高度濃縮、變短，利于chr的分散。
方法1:冷凍處理
根尖放入盛蒸餾水的指形管中，置于冰水共存的冰瓶中，然后把冰瓶放到0—3℃的冰箱中處理24小時。染色體數較多的實驗材料可適延長時間（20—40小時），但需注意勿使材料結冰。
方法2:藥劑處理
a.0.01-0.2%秋水仙素溶液處理2-4h
b.對二氯苯飽和水溶液處理3-4h
c.100ml對二氯苯飽和水溶液加1-2滴α-溴萘處理3-4h
d.0.002M8-羥基喹啉處理3-4h
藥劑處理時溫度不能過高,以10-15℃為宜。
3、固定

沖洗干凈處理的材料 卡諾氏液（冰乙酸：無水乙醇=1：3或冰乙酸：氯仿：無水乙醇=1；3：6）固定24h
可立即使用
不立即使用，置于95%酒精30min后 置入80%酒精中30min 70%酒精。4℃下保存，若保存時間較長需要重新固定后再用。
以上三步實驗員已做，我們從第4步開始做。
4、解離
1）從從培養皿里取出4-5條根置于表面皿中，用蒸餾水沖洗3-4次（廢水入塑料杯）。。
2）根洗凈后，加入數滴1N鹽酸于表面皿中，以浸泡住根為準。
3）用鑷子夾住表面皿邊緣在酒精燈上間歇式加熱2-4分鐘（發現鹽酸溶液有氣泡冒出時，立即遠離火焰），用鑷子尖夾根是否已經變軟，若變軟，則說明已解離好，否則繼續解離。（乳白色，經解離，變化為透明狀）。
5、染色
1）將解離好的根用蒸餾水沖洗干凈后，加幾滴醋酸洋紅于表面皿內，在燈上加熱，注意來回快速往返或加熱的同時，不要加熱到沸騰狀態，若沸騰馬上停止加熱。（增加根染色程度）
2）取一根已染過色的根放在載玻片上，用鑷子夾取根尖1.5mm長度處，加一滴醋酸洋紅染料，在火焰上來回烤幾下。
3）再加一滴1%的醋酸洋紅溶液，蓋上蓋玻片用解剖針的反頭垂直輕敲蓋玻片，使根尖壓成一薄層。（多余的染料用紙吸干）。
壓片時注意不要再移蓋片，否則會造成更多細胞生重疊。反復加醋酸洋紅染料->加熱-敲片，最后形成薄霧狀。
6、鏡檢
先在10X，找到分裂相后再換40倍X觀察，并繪圖。
五、分析結果
1、制出幾張好片子，當堂驗收，觀察到明顯的中期等分裂相。進行繪圖，加以文字說明。
2、對實驗過程中出現的各種問題進行分析和討論。