細菌轉導（局限性轉導）

一、實驗原理

隨著分子遺傳學的發展，轉導已成為遺傳學分析的常用方法。所謂轉導就是利用噬菌體為媒介將一個細胞（供體）的遺傳物質傳遞給另一個細胞（受體）的過程。轉導可分為二類：（1）普遍性轉導；（2）局限性轉導（專一性轉導）。本實驗以局限性轉導為例，用λ噬菌體專一性轉導半乳糖發酵基因的現象來說明轉導的基本原理，并初步掌握轉導實驗的基本技術。實驗中所采用的供體菌株是E.coli K12（λ）gal+。當此細菌受紫外線誘導后，原噬菌體被釋放出來，其中有一定比例的噬菌體帶有鄰近的半乳糖發酵基因，我們稱這種噬菌體為轉導噬菌體（即λdggal+）。當轉導噬菌體（λdggal+）感染受體菌E.coliK12gal-時，少部分（約三分之一）形成穩定的轉導子，大部分（約三分之二）以雜基因子的形式形成不穩定的轉導子。整個轉導過程見圖15-1。

三、實驗器具和藥品

1.用具：培養皿（9厘米），三角瓶（150毫升），試管（15×1.5），離心管，吸管（1毫升、5毫升、10毫升），玻璃涂棒。

2.培養基

（1）肉湯液體培養基：牛肉膏5克，蛋白胨10克，NaCl5克，蒸餾水1000毫升，pH7.0－7.2，高壓滅菌15磅15分鐘。

（2）加倍肉湯液體培養基（2E）：牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl0.5克，蒸餾水50毫升，pH7.0—7.2，高壓滅菌15磅15分鐘。

（3）肉湯半固體培養基：肉湯液體培養基中加1％的瓊脂 。

（4）肉湯固體培養基：肉湯液體培養基中加2％的瓊脂。

（5）半乳糖EMB培養基：伊紅Y0.4克，美藍0.06克，半乳糖10克，多胨10克，K2HPO42克，瓊脂20克，蒸餾水1000毫升，pH7.0—7.2，高壓滅菌8磅25分鐘。

（6）Vogel50×基本培養基（濃縮50倍的基本培養基）：MgSO4·7H2O10克，檸檬酸100克，NaNH4HPO4·4H2O175克

K2HPO4500克，蒸餾水定容1000毫升（配好后放冰箱備用）。

（7）半乳糖基本固體培養基：Vogal50×2毫升，半乳糖2克，優質瓊脂粉1.8克，蒸餾水98毫升，pH7.0，高壓滅菌8磅25分鐘。

（8）磷酸緩沖液 ：KH2PO42克，K2HPO47克，MgSO4·7H2O0.25克，蒸餾水1000毫升，高壓滅菌15磅15分鐘。

（9）生理鹽水：NaCl8.5克，蒸餾水1000毫升，高壓滅菌15磅15分鐘。

（10）藥品：氯仿。