雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（Double immunodiffusion test）

可溶性抗原與相應(yīng)抗體在半固體瓊脂凝膠內(nèi)擴(kuò)散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉淀。

雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（Double immunodiffusion test）
抗原和抗體加到瓊脂板上相對(duì)應(yīng)的孔中，兩者各自向四周擴(kuò)散，如兩者相對(duì)應(yīng)，濃度比例合適，則經(jīng)一定時(shí)間后，在抗原、抗體孔之間出現(xiàn)清晰致密的白色沉淀線。每一抗原與其相對(duì)應(yīng)抗體只能形成一條沉淀線，若同時(shí)含有若干對(duì)抗原抗體系統(tǒng)，因其擴(kuò)散速度的不同，可在瓊脂中出現(xiàn)多條沉淀線。且根據(jù)沉淀線融合情況，還可鑒定兩種抗原是完全相同還是部分相同。所以，可用此法來分析和鑒定標(biāo)本中多種抗原或抗體成份，并用以測(cè)定抗原或抗體的效價(jià)。
【材料】羊抗人全血清，小牛血清，正常人混合血清，精制瓊脂粉，生理鹽水、載玻片，打孔器（直徑3mm）、濕盒、吸管等。
【方法】
1、用生理鹽水配制1.0～1.5%瓊脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取3.5ml趁熱澆于載玻片上，制成瓊脂板。
2、待瓊脂凝固后，按右圖用打 孔器打孔，并用針頭挑去孔中瓊脂 （孔距為5mm）。
3、在①孔中加正常人混合血清，在②孔中加小牛血清，③孔中加羊抗人全血清，注意不要溢出。
4、將加好樣品的瓊脂板置于濕盒內(nèi)，于37℃溫箱內(nèi)放置24小時(shí)后觀察結(jié)果。

【結(jié)果】
觀察孔間沉淀線的數(shù)目與特征，一般可注意到以下幾種現(xiàn)象：
1、抗原與抗體孔間形成一條沉淀線，說明只有一種抗原與相對(duì)應(yīng)的抗體特異性結(jié)合，如出現(xiàn)數(shù)條沉淀線，說明有幾組不同的抗原和相對(duì)應(yīng)抗體相結(jié)合

2、根據(jù)抗原的成份可有以下三種現(xiàn)象：1）若二孔中的抗原相同，與相應(yīng)抗體形成的沉淀線融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，當(dāng)抗血清中分別含有與抗原相應(yīng)的抗體時(shí)，則形成的沉淀線相交叉；（3）若兩孔中抗原部分相同，抗血清中有各相應(yīng)的抗體，形成的沉淀線相切。
3、相應(yīng)抗原抗體所形成的沉淀線，如二者濃度相當(dāng)，沉淀線在孔中央，二者濃度不當(dāng)時(shí)，則沉淀線偏向濃度低的一側(cè)。