藥物/毒物作用后的細胞數量測定

四甲基偶氮唑鹽分析是將四甲基偶氮唑鹽還原成甲蠟的顏色，形成紫色，從而來測定活細胞中的酶活性，由于這些試劑能夠抑制細胞的活力和生長特性，該方法常用來測量毒性蛋白以及有毒物質。

一、材料和試劑

1. MTT：四甲基偶氮噻唑藍（Sigma）

2. DPBS緩沖液（Invitrogen）

3. 一般的化學品（Sigma）

二、步驟

1. 96孔板中，每孔種植500~10 000個細胞，每孔體積200 ul。留8個孔不種植細胞，做空白對照。

2. 37℃，5%CO2條件下孵育過夜，使細胞貼壁.

3. 每個孔中加2 ul 研究的藥物（溶解于DMSO中）。放置在漩渦振蕩器上，150 rpm 震蕩5分鐘，使得樣品完全混入培養液中。

4. 37℃，5%CO2條件下孵育1-5天，使得藥物/毒物發揮作用。

5. 每個96孔板準備2 ml 或者更多的MTT溶液（溶于DPBS，濃度為5 mg/ml）。MTT在溶液中不能長期穩定保存，需要現配。

6. 每孔加入20 ul MTT溶液，放置在漩渦振蕩器上，150 rpm 震蕩5分鐘，使得MTT完全混入培養液中。

7. 37℃，5%CO2條件下孵育1~5小時，使得MTT完全被代謝。

8. 倒掉培養基（可以用濾紙吸干96孔板上的殘液）

9. 用200 ul DMSO重懸甲臜（MTT的代謝產物）。放置在漩渦振蕩器上，150 rpm 震蕩5分鐘，使得甲臜充分的溶解。

10. 560 nm 處讀取光密度值，減去670 nm 的背景光密度值。光密度值的高低與細胞的數量呈正關。