DNA（基因）檢測－Southern Blot
DNA 吸印轉(zhuǎn)移
1． 室溫下將電泳后的瓊脂糖凝膠浸入 500ml 溶液 A 中，搖動 30 分鐘后換 500ml 新鮮溶液 A 再搖 30 分鐘，使 DNA 雙鏈堿變性。
溶液 A ：
5M NaCl 300.0ml
10M NaOH 50.0ml
H2 O 650.0ml
2 ．為使凝膠重新回到中性，換入溶液 B 中重復(fù)上述 1 過程。
溶液 B ：
10M 乙酸銨 200.0ml
10M NaOH 4.0ml
H2 O 1796.1ml
硝酸纖維素薄膜（ NC 膜）
3 ．料盒或盤中放一玻璃板支架，倒入 10 × SSC ，將 Whatman 3MM 濾紙放在玻璃板上，兩頭浸在液體中，用玻棒趕除氣泡。
4． 心地將瓊脂糖凝膠翻過（扣過來）滑到紙上，放平、趕除氣泡。
5． 將預(yù)先浸于溶液 B 中的 NC 膜，平鋪在膠上，用玻棒趕除氣泡。
6． 在膜上放置兩層預(yù)先以 10 × SSC 浸濕的 Whatman 3MM 濾紙。
7． 再放 6 張干燥吸水紙及 4 堆 3cm 厚的折疊吸水紙。
8． 在紙上覆蓋玻璃平板，板上可置約 250g 重物，下部緩沖液根據(jù)虹吸原理能被吸上來，凝膠上的單鏈 DNA 即可被吸出并轉(zhuǎn)移到 NC 膜上。轉(zhuǎn)移速度取決于 DNA 片段的大小。 <1kb 的片段在 0.7 ％的膠中 2 小時即可轉(zhuǎn)出，而 15kb 的片段需 15 小時以上，一般維持 12 ～ 24 小時。
9． 轉(zhuǎn)移完成后，將膠與膜取出，通過樣品槽、表明記號，并剪去膜的一角，以識別方向，此時膜與膠正面觀察的方向是一致的。
10． 去掉膠，令膜稍加干燥，用圓珠筆標(biāo)號。
11． 如為硝酸纖維素膜，則用 3MM 濾膜包好， 80 ℃烘烤 2 小時。若為尼龍膜則用紫外等照 10 分鐘，使 DNA 牢固地結(jié)合于膜上，即可用于分子雜交。
12． 將膜在 6 × SSC 中浸泡幾分鐘，放入塑料袋，按 0.2ml/cm2 膜面積加入預(yù)雜交液，排凈氣泡封閉袋口，在 68 ℃水浴中振動預(yù)雜交 2 ～ 4 小時。
13． 取出塑料袋，在一角切一缺口，倒出預(yù)雜交液，按 50 μ l/cm2 膜面積加入雜交液，排凈氣泡、封口，再于 68 ℃水浴中振動雜交，一般來源于真核細(xì)胞的總 DNA ，需雜交 12 ～ 16 小時。
14． 雜交結(jié)束后取出塑料袋，剪開邊緣，迅速將膜轉(zhuǎn)到 2 × SSC 和 0.5 ％ EDTA 溶液中室溫下洗滌（振蕩） 5 分鐘，再將膜轉(zhuǎn)移人 2 × SSC 和 0.1 ％ SDS 溶液中洗滌 15min ，然后將膜浸入 0.1 倍 SSC 和 0.5 ％ SDS 溶液中 68 ℃振蕩洗滌 2 小時，換同樣溶液再洗滌 30 分鐘。
15． 取出濾膜在 Whatman 濾紙上晾干，放入塑料袋或用塑料紙包好，在暗室中將 X 光片與濾膜接觸，封于曝光夾中，進(jìn)行放射自顯影 1 ～ 15 天。
16． X 光片被取出。常規(guī)顯定影后顯示雜交情況，如曝光時間不夠可重新放入 X 光片再次曝光，直到帶型顯示清晰。
