巨噬細胞功能的檢測

　人巨噬細胞可從外周血或經斑蝥激發的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離，但操作繁鎖，得量不多。許多實驗室在進行基礎或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關系、或篩檢免疫 增強藥物和探討其作用機制時，常選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象，常用的檢測方法如下。
　　（一）炭粒廓清試驗
　　正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細胞約吞噬清除10％炭粒，據此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁（炭粒懸液），間隔一定時間反復取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細胞的功能。
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　　巨噬細胞具有較強的吞噬功能，實驗室常用比細菌大的細胞性抗原 作為被吞噬顆粒，如雞紅細胞。其檢測原理是將受檢細胞與適量的顆粒抗原混合后，置37℃保溫0.5～1h，其間時加振搖，最后離心取測定細胞制成涂片，染色鏡檢，分別計數出吞噬百分比和吞噬指數。各實驗室應根據自己的條件建立正常參考值。
　　（三）巨噬細胞溶酶體酶的測定
　　巨噬細胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等，測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一。
　　1．酸磷酸酶的測定
　?。?）硝酸鉛法：本法優點是用普通試劑，價格便宜，一般實驗室均有條件做，封片后可較長時間保存，并可用電子顯微鏡 研究觀察細胞的超微結構。缺點是細胞必需固定，而且固定條件要求嚴格，如處理不當酶活性易消失，反應步驟也較多。
　　該法基本原理是在適當的酶性條件下，巨噬細胞內的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后，后者與硝酸鉛反應產生磷酸鉛，而磷酸鉛再與硫酸銨反應則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內酸所在處，顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據顆粒的數量和粗細不同而分級判斷，顆粒數量少則細的為＋，顆粒多而粗的為＋＋，顆粒很多且很粗的為＋＋＋。
　?。?）偶氮法：本法操作簡便，反應液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結構中的羥基（－OH）鄰近的活潑碳原子，立即與偶氮染料起反應，而產生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點是封片后保存時間短。
　　2．非特異性酶的測定該酶比較穩定，酶活性喪失較慢，細胞經涂片干燥，置室溫至少可保存半天至一天，因此特別有利于臨床檢驗室采用。
　　常用α-萘醋酸法，該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速與偶染料結合，形成有色反應物而沉積。
　　（四）巨噬細胞促凝血活性測定
　　激活巨噬細胞可產生一種與膜結合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經37℃預溫的正常兔血漿和CaC12混合液，加入經粘附單層巨噬細胞的試管中，移置37℃，即時記錄血漿凝固時間。實驗證明當巨噬細胞與LPS、腫瘤相關抗原或HbsAg等溫育后，可見血漿凝固時間明顯縮短。本法穩定方便，也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。
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　　成熟的巨噬細胞表面具有Fc受體和C3b受體，這些受體能識別經IgG和C3b調理的顆粒，并迅速與之結合，促使細胞對相應顆粒的吞噬，為此檢測這些受體可間接判斷巨噬細胞的功能。常用抗羊紅細胞致敏的羊紅細胞懸液作指示物進行EA花環試驗，也可用抗原（E）抗體（A）補體（C）復合物作EAC花環試驗。由于操作繁鎖，現僅供研究用。