細胞介導的細胞毒作用(CMC)檢測法:靶細胞的制備
靶細胞的制備(分離腫瘤細胞和TIL)
1.無菌摘取腫瘤,置預冷的含抗生素的RPMI-1640 培養液中,剪去結締組織,剪碎瘤體至1~2mm大小。放置2~10分鐘讓組織塊沉淀,吸去上清液。
2.將沉淀的組織塊置5~10倍體積的消化液中,37℃中攪拌或振蕩1~4小時或室溫過夜。用力吹打組織塊,即可得到單個細胞懸液。
3.離心400×g 10分鐘,除去消化液。用5倍體積的RPMI-1640培養液懸浮細胞。將細胞懸液小心加到雙層淋巴細胞分離液上。
4.離心400×g 30分鐘,上層分界面是新鮮腫瘤細胞,下層分界面是腫瘤組織中的淋巴細胞(TIL),可用于誘導殺傷活性和擴增。
5.用RPMI-1640培養液洗滌腫瘤細胞兩次,用作檢測LAK細胞活性的靶細胞。此細胞可以在含50%人AB血清和10%二甲基亞砜(DMSO )的RPMI-1640培養液中以1×107~5×107/ml的濃度置液氮中凍存,用前復蘇。