染色體掃描電鏡標(biāo)本制備及觀(guān)察
一、原理
掃描電鏡用于觀(guān)察標(biāo)本的表面形態(tài)。用戊二醛和鋨酸處理的染色體標(biāo)本，經(jīng)單寧酸(或硫卡巴肼)還原可獲得較好的導(dǎo)電染色效果。在掃描電鏡下可觀(guān)察到染色體的三維結(jié)構(gòu)，也可用于常規(guī)染色體核型、G帶染色體核型、高分辨染色體核型的分析及染色體結(jié)構(gòu)異常識(shí)別，以彌補(bǔ)光鏡的許多不足。在掃描電鏡下還可清楚地觀(guān)察到腫瘤細(xì)胞癌基因擴(kuò)增結(jié)構(gòu)—雙微體。因而此方法廣泛用于細(xì)胞生物學(xué)和遺傳學(xué)的許多研究。
二、染色體標(biāo)本制備的方法
1．常規(guī)染色體標(biāo)本制備，同實(shí)驗(yàn)十。
2．取一張?jiān)诠忡R下觀(guān)察過(guò)的染色體標(biāo)本片選擇分散良好的分裂相，并在背面做出標(biāo)記以便電鏡觀(guān)察時(shí)易于尋找。
3．3:1甲醇一冰乙酸脫色，用磷酸緩沖液洗。
4．2.5％戊二醛固定30分鐘。
5．0.1mol／L(pH7.4)PBS漂洗3次。
6．1％鋨酸固定5分鐘。
7．蒸餾水洗3次。
8．2％單寧酸處理5分鐘。
9．蒸餾水洗3次。
10．1％鋨酸處理lO分鐘。
11．水洗3次。
12．30％→100％乙醇逐級(jí)脫水，每級(jí)5分鐘。
13．臨界點(diǎn)干燥(也可用空氣干燥)。
14．把標(biāo)本片標(biāo)記的核型所在處用玻璃切下約5×5mm2 ，用導(dǎo)電膠固定在標(biāo)本臺(tái)上。
15．離子鍍膜(也可不鍍膜直接觀(guān)察)。
16．掃描電鏡觀(guān)察、照相。
三、染色體形態(tài)觀(guān)察
低倍觀(guān)察可見(jiàn)染色體的不同分裂相，在分散較好的分裂相中，染色體呈三維立體形態(tài)。
高倍觀(guān)察染色體呈長(zhǎng)短不等的園柱狀，兩條單體由著絲粒相連，其表面凹凸不平，沿縱軸有許多環(huán)形溝把染色體分成許多節(jié)段。可見(jiàn)染色體表面由許多細(xì)纖維構(gòu)成。
