動物組織RNA的提取

實驗?zāi)康模?/strong>掌握由動物組織中提取總RNA的方法

實驗原理：Trizol試劑是一個包含酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液，其在裂解細(xì)胞的同時抑制RNase的活性，隨后加入氯仿，酚會大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下層的氯仿酚溶液中，RNA則分布在上層的水相中，最后用異丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗滌沉淀，這樣就可以得到比較純凈的總RNA.

實驗步驟：

① 先在研缽中加入液氮，再將組織剪成小塊在液氮中磨成粉末，用液氮預(yù)冷的藥匙取50～100mg組織粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意組織粉末總體積不能超過所用Trizol體積的10%），充分混合均勻。

② 室溫放置5min，然后加入200 的氯仿，蓋緊EP管并劇烈搖蕩15秒鐘。

③ 12000rpm離心10min，取上層水相于一新的EP管中（千萬不要將中間的沉淀層和下層液混入，否則重新離心分離），加入500  異丙醇，溫和顛倒混勻。室溫放置10min，12000rpm離心10min。

④ 小心地棄去上清液，加入1ml的75%乙醇，渦旋混勻，4℃下12000rpm離心5min。重復(fù)操作一次。

⑤ 棄去上清液（盡量將殘余液體除去），室溫或真空干燥5～10min（注意不要干燥過分，否則會降低RNA的溶解度）。用30  DEPC處理過的水將RNA溶解，必要時可55℃～60℃水浴 10min。RNA可進(jìn)行mRNA分離，或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。