慢病毒的濃縮與純化

方法一超速離心沉淀法

1. 取6個(gè)Ultra-clear SW28離心管，用70%乙醇消毒后，放在超凈工作臺(tái)中打開紫外燈繼續(xù)消毒30分鐘。

2. 每個(gè)Ultra-clear SW28離心管中加入約32ml的預(yù)先處理的病毒上清液。

3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。將移液管一直插入到離心管的底部，緩慢將蔗糖溶液打出4 ml。同樣地，將剩下8 ml的蔗糖溶液分別加入到另兩個(gè)離心管中。另取一支干凈的移液管，對(duì)剩下3管進(jìn)行同樣處理。

4. 用PBS調(diào)整各管的重量，使對(duì)應(yīng)的離心管之間的重量相差不超過0.1g。

5. 按次序?qū)⑺?個(gè)離心管放入Beckman SW28 超速離心轉(zhuǎn)頭中。

6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 離心2小時(shí)。

7. 小心將管子從轉(zhuǎn)頭中取出。倒掉上清，將離心管倒扣在紙巾上放置10分鐘使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底應(yīng)當(dāng)有可見的沉淀。

8. 每管中加入100ml 不含鈣和鎂的PBS洗下沉淀。

9. 將SW28超速離心管插入到50ml錐底離心管中，蓋上蓋子。

10. 在4℃溶解2小時(shí)，每隔20分鐘輕輕震蕩。

11. 4℃，500g離心1分鐘，使溶液集中于管底。

12. 用200μl 移液器輕柔吹打使沉淀重懸。避免產(chǎn)生泡沫。將所有管中的液體集中到一個(gè)SW28離心管中。

13. 集中后的病毒懸液分裝成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲(chǔ)存在-80 ℃。

方法二 PEG-8000濃縮法

1. 5X PEG8000+NaCl配制稱取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q純水中；121攝氏度 30min 濕熱滅絕 30min；保存在4℃。

2. 使用0.45μm濾頭過濾慢病毒上清液；

3. 每30ml過濾后的病毒初始液，加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml；

4. 每20～30min混合一次，共進(jìn)行3-5次；

5. 4度放置過夜；

6. 4度，4000 g，離心 20min；

7. 吸棄上清，靜置管子1～2分鐘，吸走殘余液體；

8. 加入適量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀；

9. 集中后的病毒懸液分裝成50 μl每份，保存在成品管中。用碎干冰速凍后儲(chǔ)存在-80 ℃。