RNA 的制備與分析

RNA:主要由四種核糖核苷酸組成，即腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、尿嘧啶（U）。天然的RNA并不象DNA那樣呈雙螺旋結構，而是單鏈線形分子。只有局部區域為雙螺旋結構（約占RNA分子的50%）。RNA分子中的核苷酸至少75個，多的可達數千個。

RNA的分類：（1）信使RNA（mRNA）（2）轉移RNA（tRNA）（3）核糖體RNA（rRNA）（4）小RNA（snRNA）

常用的RNA分析方法：（1）RT-PCR（Reverse Transcription PCR）（反） 逆轉錄聚合酶鏈反應（2）原位雜交（In situ hybridization）（3）Northern Blot（4）RNA斑點和狹線雜交（5）S1核酸酶作圖法（6）引物延伸法。

一、RNA的提取與純化：

（一）控制RNA酶的活性：

1、控制污染：

（1）專用的RNA操作室、專用器械。

（2）操作時戴口罩、帽子、手套。

（3）實驗用器皿、吸頭、離心管應為新的。

（4）所配制的水溶液，盡可能用DEPC處理。

2、已污染RNA酶的器具的處理

（1）在180℃的高溫下干烤8小時或更長時間。

（2）氯仿沖洗。

（3）雙氧水浸泡。

（4）0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水浸泡。

3、常用的RNA抑制劑：

（1）焦磷酸二乙酯（DEPC）：一種強烈但不徹底的RNA酶抑制劑，通過和RNA酶的活性基團組氨酸的咪唑環反應從而抑制酶的活性。

（2）異硫氰酸胍：最有效的RNA酶抑制劑。在裂解組織細胞的同時，也使RNA酶失活。它既可破壞細胞結構使核酸從核蛋白中分離出來，又對RNA酶有強烈的變性作用。

（3）氧釩糖核苷復合物：由氧化釩離子和核苷形成的復合物，與RNA酶結合后幾乎能完全抑制RNA酶的活性。

（4）RNA酶的蛋白抑制劑（RNasin）：從人胎盤中分離出來，可以和多種RNA酶結合，使其失活。

（5）其它：SDS、尿素、硅藻土等對RNA酶也有一定的抑制作用。