慢病毒載體概況及發展歷程

1、慢病毒載體概況

慢病毒是逆轉錄病毒科亞科之一，分為兩類：靈長類和非靈長類慢病毒。靈長類慢病毒包括HIV-1、HIV-2、猴免疫缺陷病毒( SIV)，非靈長類慢病毒包括貓免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)、馬免疫缺陷病毒(EIAV)等。

多項研究表明慢病毒載體具有可感染非分裂期細胞、可長期表達、而且宿主細胞免疫反應小、細胞毒性小等優點。因其自身結構特點，可包裝8～lOkb，適用于多基因表達系統，而且基因組包含較少的核苷酸，抵抗基因沉默能力較強，宿主體內更以表達，而且在整合時整個轉錄區域都可以整合，降低了慢病毒對啟動子的激活機會。

2、慢病毒載體歷史及構建

目前，使用不同種屬來源的慢病毒載體：

第一代慢病毒載體系統是以Naldini及Kafri構建的三質粒系統為代表，該系統由包裝質粒、包膜質粒及載體質粒3種質粒組成。載體質粒攜帶了5’端LTR和全部5’端非翻譯區域、以及rev應答元件( RRE)及3’端LTR。

包裝質粒由HIV-1蒔病毒基因組做簡單修改得到，其5’端LTR由異源病毒啟動子／增強子元件取代。包膜質粒的改進（引入了VSV-G基因）降低了HIV-1恢復成野生型病毒的可能，擴大了所能感染細胞的類型，同時VSV包膜提高了HIV載體穩定性，從而使HIV-1載體滴度由105TU/mL轉錄單位達到了lOsTU/mL。

第二代慢病毒載體系統又去除了包裝質粒的4個輔助基因，進一步降低了野生型病毒的可能性，最大的優點是對病毒滴度影響不大。

自身失活型( SIN)慢病毒載體：3’端LTR的U3區啟動子發生失活突變后，將在逆轉錄過程中轉移至5'LTR。如果這樣的載體整合入靶細胞，將不會產生完整長度的載體RNA。自身失活型載體技術最先應用于莫洛尼氏小鼠白血病病毒(MoMLV)載體和鳥類的脾壞死病毒(SNV)載體。